基于HIV逆转录酶活性的病毒载量检测方法的建立和初步运用

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背景:HIV的病毒载量,在发达国家已经成为监测HIV感染者疾病进展的重要指标。由于高昂的设备价格和试剂费用及其严格的技术要求,我国目前只有少数实验室能开展这项检测。我国急需一种廉价、易操作、可靠的HIV病毒载量检测技术。目的:建立一种基于HIV逆转录活性测定的病毒载量检测方法,并对其稳定性、可靠性、敏感性及与基于RNA数量的病毒载量的相关性等进行评价,并初步运用抗病毒治疗后的病毒载量监测。方法:用基于HIV逆转录酶活性测定的病毒载量检测方法和基于RNA数量的病毒载量测定方法同时检测来自87名HIV感染者的215份标本,并对结果进行分析。HIV逆转录酶活性的测定包括逆转录酶的纯化和活性测定两个步骤。RNA病毒载量的测定包括RNA的提取和数量的测定。结果:同批次检测的变异系数为0.6%到12%,不同批次的检测系数为1.12%到9.0%。逆转录酶的活性检测的特异性为100%。当HIV病毒载量在51到400拷贝/毫升时,HIV逆转录酶活性的检出率为62.5%;病毒载量在10,001到50,000拷贝/毫升时,检出率到达97.9%;在病毒载量超过500,000拷贝/毫升后检出率达到100%。两种方法测定的病毒载量有良好的相关性(r=0.95,P<0.001)。在运用于HAART治疗后病毒载量的监测中发现两种方法相关性良好(r=0.99,P<0.01),而且基于HIV RT活性的病毒载量测定的结果与CD4+T细胞计数负相关(r=0.58,P<0.01)。结论:基于HIV逆转录酶活性的HIV病毒载量测定方法有良好的稳定性、特异性和敏感性,并且与基于RNA数量的HIV病毒载量有良好的相关性。基于逆转录酶活性的病毒载量测定方法很可能是一种能被我国患者能承受的、可行的、简单可靠的能替代HIV RNA病毒载量检测的方法,尤其适用于我国基层的HIV感染者的病毒载量的监测。
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