肝脏型脂肪酸结合蛋白的重组表达及其单克隆抗体的制备和鉴定

来源 :2011年北方七省市区动物学学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong499
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  目的:制备抗肝脏型脂肪酸结合蛋白 (LFABP)的单克隆抗体(mAb)并进行亚型和特异性鉴定。方法:将原核表达载体 pET32a-LFABP,转化入E.Coli BL21((DE3)菌株,经IPTG诱导表达。应用亲和层析、凝胶过滤层析分级纯化目的蛋白,得到纯度较高的蛋白。以重组的LFABP蛋白为免疫原,免疫Balb/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞Sp2/0融合,HAl选择性培养和间接ELISA.进行筛选,获得分泌鼠抗人LFABP蛋白mAb的杂交瘤细胞株,通过ELISA、Western blot等方法检测其特异性。结果:通过原核表达,并经镍柱和凝胶过滤层析纯化后得到纯度>90%的蛋白,SDS-PAGE分析后大小约15 KD,与理论值相一致。纯化的LFABP重组蛋白免疫小鼠后经过筛选后得到2株稳定分泌抗人LFABP的mAb杂交瘤细胞株,分别命名为3E6和587,其亚型分别为IgGl和IgG2a。通过Western blot分析能与细胞中表达的内源LFABP发生特异性反应。结论:以纯化的重组LFABP为免疫原成功制备了鼠抗LFABP的mAb,为进一步研究脂肪酸结合蛋白LFABP的生物学特性、参与脂肪酸代谢调控及其机理研究、与药物的相互作用提供重要基础和研究依据,并将为相关疾病的治疗奠定了基础。
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