【摘 要】
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利用SMART cDNA文库构建试剂盒首次构建了健康虾夷扇贝外套膜和肾脏两种组织的cDNA文库.两个文库容量分别为2.30×106 cfu/ml和1.20×106 cfu/ml,重组率均超过98％,平均插入片段长度均大于1 kb,文库质量符合标准要求.随机选取的4009个克隆进行5′端测序,得到3884个有效序列(外套膜：923个,肾脏：2961个),测序成功率96.9％.经过质量控制和拼接,共得
【机 构】
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辽宁省海洋水产科学研究院,辽宁省海洋水产分子生物学重点实验室,辽宁大连116023 辽宁省海洋水产
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利用SMART cDNA文库构建试剂盒首次构建了健康虾夷扇贝外套膜和肾脏两种组织的cDNA文库.两个文库容量分别为2.30×106 cfu/ml和1.20×106 cfu/ml,重组率均超过98％,平均插入片段长度均大于1 kb,文库质量符合标准要求.随机选取的4009个克隆进行5′端测序,得到3884个有效序列(外套膜：923个,肾脏：2961个),测序成功率96.9％.经过质量控制和拼接,共得到2007条单基因簇(unigenes),包含363个序列重叠群(contigs)和1644条单一序列(singletons).通过BLASTx和BLASTn搜索比对,共有659个Unigenes(外套膜：157个；肾脏：502个)获得了基因注释(E＜e-5),占Unigene总数的32.84％.对Unigene的功能和分类进行了初步分析,发现多种与免疫相关的基因,如凝集素、超氧化物歧化酶、溶菌酶、大防卫素等以及与机体运动相关的蛋白,如肌原蛋白、肌球蛋白、肌动蛋白等.利用SSRIT在线工具对2007条Unigene查找微卫星发现,有69个EST中含有微卫星序列,其中40个可以用于引物设计.虾夷扇贝cDNA文库的成功构建,为进一步的EST分析、功能基因的表达和克隆、多态性EST-SSR的筛选,以及虾夷扇贝分子遗传学研究、种质资源评价和分子选育等奠定了基础.
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