【摘 要】
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目的:用热休克元件(HSE)8个重复序列修饰人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp),比较该调控元件在37℃及43℃下不同细胞株中的转录活性. 方法:设计引物应用PCR法从人结肠癌基因
【机 构】
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西安交通大学第一附属医院普通外科,陕西西安710061
【出 处】
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2015年中国医师协会肛肠医师分会学术年会
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目的:用热休克元件(HSE)8个重复序列修饰人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp),比较该调控元件在37℃及43℃下不同细胞株中的转录活性.
方法:设计引物应用PCR法从人结肠癌基因组中克隆hTERTp;将hTERTp与基因合成的8HSE片段,重组于双荧光素酶报告载体pGL4.2中,采用TurboFectTM Transfection Reagent,将重组质粒和内参质粒pGL4.74(含TK启动子)共转染于hTERT高表达的SW480细胞株和hTERT低表达的MKN28细胞株,双荧光素酶法检测hTERT启动子在37℃及43℃下的转录活性.
结果:PCR、酶切和DNA测序鉴定hTERTp、8HSE片段克隆成功,并鉴定荧光素酶报告基因载体pGL4.2-hTERTp和pGL4.2-8HSE-hTERTp构建成功,荧光素酶检测结果显示:hTERTp在SW480和MKN28中相对转录活性分别为28.44、7.80,差异具有统计学意义,8HSE-hTERTp在37℃(6.44)及43℃(327.34)转录活性差异有统计学意义(均P＜0.05).
结论:热诱导对hTERTp转录活性无明显影响,而热诱导对8HSE修饰的hTERTp转录活性有明显的增强作用,该调控元件具有肿瘤细胞表达的靶向性和特异性,在用于靶向性肿瘤基因治疗联合肿瘤热疗方面具有应用前景.
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