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目的:益气清热膏是临床用于治疗慢性肾炎蛋白尿的经验处方,我们以往的研究发现益气清热膏具有良好的降低尿蛋白和保护肾功能的作用.益气清热膏含药血清及益气清热膏中药单体成分均能通过Wnt/β-catinin通路有效减轻LPS诱导的系膜细胞增殖.本研究旨在观察中药益气清热膏对嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)肾病大鼠肾组织炎症、肾实质细胞凋亡的影响,探讨益气清热膏治疗作用的分子机制.方法:36只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、PAN模型组、益气清热膏组,每组各12只.除假手术组予等量生理盐水外,其余各组大鼠采用颈静脉插管一次性注射嘌呤霉素氨基核苷造模.分别在造模前(0天)与造模后的第3天、5天、10天、15天检测24小时尿蛋白定量;第10天、15天分批处死,检测血生化,取肾组织行光镜和电镜检查;实时定量PCR法、免疫组化法检测肾组织炎症相关指标TNF-α及受体TNFR1、IL-1β、趋化因子MCP-1、单核/巨噬细胞标记物CD68在肾组织中的表达;实时定量PCR法、Western blot检测肾组织中凋亡相关指标cleaved-caspase3与Bcl-2蛋白的表达;TUNEL染色观察凋亡.结果:①造模后模型组出现了大量蛋白尿和血清甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇升高,益气清热膏有明显的改善作用.②电镜观察模型组足突广泛肿胀融合,部分足突消失,裂孔膜消失,足细胞吸收空泡形成,内皮细胞部分肿胀,内皮窗孔排列紊乱.益气清热膏可减轻足突的肿胀融合,维持足突正常形态(图1).PAS染色光镜所见:模型组远端肾小管和集合管大量蛋白管型,近端小管空泡变性,益气清热膏具有改善作用(图2).各组肾小球未见明显改变.②模型组肾组织炎症相关指标TNF-α、TNFR1、IL-1p、MCP-1表达明显上调,肾间质单核/巨噬细胞浸润明显.益气清热膏可抑制该炎症反应.③TUNEL染色显示模型组出现明显肾实质细胞凋亡,益气清热膏能减少TUNEL染色阳性的凋亡细胞数.益气清热膏能降低caspase-3 mRNA及蛋白的表达,以第10天最为显著(P<0.05),同时还具有升高Bcl-2蛋白表达的趋势(P<0.05).结论:益气清热膏可减轻PAN模型大鼠肾损伤,其作用的主要环节可能与通其抑制肾组织炎症、减少肾脏实质细胞凋亡有关.