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目的 血小板内皮细胞粘附分子-1 (Platelet Endothelial Cell Adhesion Molecule-1,PECAM-1)是大量表达于血管内皮细胞的一种蛋白,属于免疫球蛋白超家族.研究表明PECAM-1分子的胞外段参与到各种血管功能的调控中,包括血管渗透性,血管新生以及,白细胞跨内皮运动等等,但其胞内段对内皮细胞连接完整性和渗透性的作用却还未知.因而通过CRISPR原位删除PECAM-1分子的胞内段,探讨其在维持内皮细胞连接完整性和渗透性中的作用.方法 利用常间回文重复序列丛集(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats,CRISPR)的原位基因剪辑功能,删除永生化人脐静脉内皮细胞(iHUVECs)中PECAM-1分子的胞内段,从而得到PECAM-1-△CD.通过电子细胞基质阻抗判断(Electric Cell-substrate Impedance Sensing,ECIS)观察在静息状态时以及刺激因子作用下,胞内段对内皮细胞连接完整性和渗透性的影响.利用共聚焦显微镜检测不同形态PECAM-1在细胞表面的分布情况,transwell实验定量检测白细胞跨内皮迁移运动.结果 ECIS显示,在静息状态下,含PECAM-1-△CD的单层iHUVECs的基线电阻水平低于正常iHUVECs,表明其屏障功能弱于正常iHUVECs；用炎症因子凝血酶破坏屏障功能后,含PECAM-1-△CD的iHUVECs恢复速率低于正常iHUVECs.共聚焦显微镜显示正常PECAM-1主要分布在细胞与细胞的交界处,而PECAM-1-△CD则无法定位到细胞交界处,在细胞膜表面呈弥散分布状态.transwell实验发现,活化白细胞能够穿过表达全长PECAM-1单层内皮细胞,但却不能穿过表达PECAM-1-△CD的单层内皮细胞.结论 PECAM-1分子胞内段参与维持静息状态内皮细胞的屏障功能,对受损后屏障功能的恢复有促进作用,并且对维持内皮细胞完整性和渗透性起到重要作用,PECAM-1胞内段的缺失会抑制白细胞的跨内皮运动.