论文部分内容阅读
沃尼妙林为新型截短侧耳素类药物,对鸡毒支原体极其敏感,同时在鸡体内具有优良的药动学特征,是未来治疗鸡毒支原体感染较为理想的药物.但目前有关沃尼妙林对鸡毒支原体的研究较匮乏,无法为临床使用该药提供足够的科学用药依据.本文拟通过体内药动药效(PK/PD)同步模型来研究沃尼妙林对鸡毒支原体的药效作用特征.为消除动物自身免疫对药物作用的影响,对3日龄无鸡毒支原体感染雏鸡,大腿肌肉注射60 mg/kg环磷酰胺,连续注射三天,建立中性粒细胞减少模型.对免疫系统破坏了的雏鸡进行气管灌注鸡毒支原体0.2 mL约108 CCU鸡毒支原体,连续攻毒三天,建立鸡毒支原体感染雏鸡模型.对感染雏鸡进行肌肉注射1、10、20 mg/kg b.w.沃尼妙林考察其药动学特征.选取50只感染雏鸡,随机选取5只分离气囊、肺、气管,其余45只随机分为9组,分别肌注生理盐、1、2、4、6、8、10、15、20 mg/kg沃尼妙林三天.最后一次给药24 h以后处死雏鸡,分离每只鸡的气囊,肺,气管作为一个样品.样品保存于-80℃,利用DNA提取试剂盒进行细菌DNA提取.采用荧光定量PCR建立定量测定菌液及组织样品中鸡毒支原体拷贝数的方法,鸡毒支原体拷贝数的对数值与荧光定量PCR的Ct值在3×102 CCU/mL～3×108 CCU/mL范围内成线性关系,相关系数R2为0.9976,即可通过荧光定量PCR检测雏鸡给药前后鸡毒支原体的载菌量.利用Sigmoid Emax模型将参数AUC0-24/MIC与给药前后鸡毒支原体细菌数量的改变进行拟合,得出最优的PK/PD参数及达到不同作用效果的参数值.最后利用Toutain推荐的方法进行给药剂量的计算.雏鸡经环磷酰胺处理后粒细胞数量小于1000/mm3并且可持续8天.粒细胞减少的雏鸡通过气管灌注鸡毒支原体后,95％的雏鸡的精神萎靡,闭眼,解剖发现气囊有奶酪样物质,气管有血丝.将气囊,气管,肺组织分离进行DNA提取测定鸡毒支原体DNA得出雏鸡细菌载菌量基本稳定在0.3 × 106 CCU.发病率为95％,死亡率为17％.而对照组的雏鸡无临床症状,分离组织测DNA亦未测出.在1mg/kg～20 mg/kg b.w.剂量范围内药动学参数AUC0-24、 Cmax与给药剂量成线性关系,由此可推算出任何介于1 mg/kg～20 mg/kg b.w.给药剂量下的药动学参数AUC0-24、Cmax.经拟合发现AUC0-24/MIC与沃尼妙林对鸡毒支原体在体内的抗菌作用存在显著的相关性(R2=0.9669).预测当AUC024/MIC值为28,820、38,030和56,256时可达到抑制鸡毒支原体生长(0Log10 CCU/mL),减少1 Log10 CCU/mL,减少2.5 Log10 CCU/mL的作用效果.对于MIC为0.0014 μg/mL或者更小的鸡毒支原体感染,为达到使鸡毒支原体减少2.5 Log10 CCU/mL的效果推荐的给药剂量为6.5mg/kg,一天一次,一共给药三天,为临床合理用药提供理论依据.