【摘 要】
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通过建立肠道病毒71型(EV71)的荧光定量RT-PCR检测方法,为构建EV71猕猴模型提供检测技术.以克隆EV71病毒VP1基因构建重组质粒为标准品,计算其拷贝数,经倍比稀释构建标准曲线,并进行特异性、灵敏性和重复性检测.同时经气管注射EV71病毒建造手足口猕猴模型,采用注射剂量分别为1×106.5CCID50、4.29× 106.5 CCID50、1.86× 107.5 CCID50感染新生猕
【机 构】
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四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室,四川温江611130;四川农业大学动物医学院/动物疫病与人类健康中心四川省重点实验室,四川雅安625014
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十二次全国学术研讨会
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通过建立肠道病毒71型(EV71)的荧光定量RT-PCR检测方法,为构建EV71猕猴模型提供检测技术.以克隆EV71病毒VP1基因构建重组质粒为标准品,计算其拷贝数,经倍比稀释构建标准曲线,并进行特异性、灵敏性和重复性检测.同时经气管注射EV71病毒建造手足口猕猴模型,采用注射剂量分别为1×106.5CCID50、4.29× 106.5 CCID50、1.86× 107.5 CCID50感染新生猕猴和断奶期猕猴,并用建立的实时荧光定量RT-PCR方法监测感染后0～14天血液样品中病毒含量的动态变化.结果表明,建立的方法最低可检测到102copies的病毒RNA,比普通RT-PCR方法灵敏度高100倍,标准曲线的线性范围在103～108 copies/μtL之间,PCR扩增率达到99.37％,对其他肠道病毒检测结果均为阴性,具有特异性强、灵敏性高、稳定性好的特点；血液样品测定分析结果显示,病毒的增殖拷贝数与感染剂量和猕猴的年龄具有相关性.表明该荧光定量PCR技术可用于EV71猕猴模型病毒载量的定量检测.
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