【摘 要】
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目的：布鲁氏菌外膜蛋白BP26是布鲁氏菌的重要毒力因子,本研究采用bp26基因缺失株和BP26蛋白分别与胚胎滋养层细胞(HPT-8)作用,探讨布鲁氏菌bp26基因的生物学功能.材料方法：从布鲁氏菌疫苗株M5-90克隆出bp26基因并在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中表达,采用Ni柱亲和层析法纯化BP26蛋白,经SDS-PAGE、Western-Blot检测并鉴定疫原性.采用overlap
【机 构】
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石河子大学动物科技学院,新疆石河子832003
【出 处】
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2012年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会学术研讨会
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目的：布鲁氏菌外膜蛋白BP26是布鲁氏菌的重要毒力因子,本研究采用bp26基因缺失株和BP26蛋白分别与胚胎滋养层细胞(HPT-8)作用,探讨布鲁氏菌bp26基因的生物学功能.
材料方法：从布鲁氏菌疫苗株M5-90克隆出bp26基因并在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中表达,采用Ni柱亲和层析法纯化BP26蛋白,经SDS-PAGE、Western-Blot检测并鉴定疫原性.采用overlap技术将目的片段bp26基因的上臂插入到自杀载体pGEM-7zf中,电转至布鲁氏菌疫苗株M5-90感受态细胞中,成功筛选出具有遗传稳定性的bp26基因缺失株.用BP26蛋白和bp26基因缺失株分别侵染HPT-8细胞,观察细胞形态变化,ELISA检测上清中的细胞因子.
结果：成功获得了布鲁氏菌BP26蛋白和M5-90Abp26缺失株，BP26蛋白侵染HPT-8细胞后可以引起细胞的炎性反应，对细胞有细胞毒性作用；bp26基因缺失株对HPT-8细胞产生的细胞因子IL-6、TNF-α和LDH均高于PBS对照组，差异极显著(P<0.01)，bp26基因在布鲁氏菌侵染宿主细胞后产生的细胞因子IL-6、TNF-α均高于M5-90对照组，LDH和IL-IO均低于M5-90对照组，差异显著(P<0.05)。
结论：动物感染布鲁氏菌后妊娠母畜典型的症状是流产，产死胎、弱胎或是早产，通常在怀孕后2个半月内出现胎儿死亡或子宫炎。除了流产症状之外，还可以出现睾丸炎，跛行，后肢麻痹或脊椎炎等炎性反应的临床症状。布鲁氏菌不具有外毒素，也没有典型的Ⅲ型分泌系统，一般认为布鲁氏菌的毒性主要是由其毒力因子引起的，外膜蛋白是其主要毒力因子之一，可以引起宿主细胞的各类炎性反应。本研究通过分别测定BP26蛋白和bp26基因缺失株侵染HPT-8细胞后产生的细胞因子的变化量，认为BP26蛋白可以引起HPT-8细胞的炎性反应，有细胞毒性作用，bp26基因缺失株对HPT-8细胞有损伤作用，并且bp26基因缺失株对细胞的毒性作用要小于M5-90疫苗株，说明bp26基因在布鲁氏菌侵染宿主细胞过程中起重要作用。
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