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本研究通过Real-Time PCR方法,分析了20例临床病例的肿瘤组织和癌旁组织,发现microRNA-27a(miR-27a)在胃癌组织中的表达较正常组织是上调的,同时也检测了胃癌细胞株中microRNA-27a的表达情况,我们发现在胃癌细胞株NCI-N87、MGC-803、AGS、BGC-823、HGC-27、SGC-7901中miR-27a的表达量都是显著高于人正常胃粘膜细胞株GES-1和非肿瘤组织中的表达量,这些结果使得我们推测miR-27a在胃癌中可能是起到一个致癌的作用。体外对胃癌细胞株GES-1和MGC-803分别转染过表达和敲低miR-27a的质粒载体,通过MTT进行增殖检测,我们发现miR-27a的过表达促进了胃癌的增殖。我们又构建稳定表达miR-27a转染细胞株和稳定敲低miR-27a转染细胞株,体外进行克隆成球实验和体内进行了裸鼠皮下瘤实验,我们发现体外过表达miR-27a能够促进体外克隆成球能力和克隆球增殖速度;体内我们发现过表达miR-27a能够促进裸鼠体内成瘤能力和肿瘤的增殖速度。为了探究miR-27a影响胃癌增殖的作用机制,我们首先通过miRbase数据库了解到miR-27a有两个剪切成熟体miR-27a-3p和miR-27a-5p,我们分别合成了miR-27a-3p mimics/inhibitor和miR-27a-5p mimics/inhibitor,将它们转染胃癌细胞株并用MTT检测增殖能力的变化,我们发现在这两个剪切成熟体中miR-27a-3p在胃癌增殖能力的影响中起到主要的作用。为了进一步探讨其分子机制,我们随后通过Targetscan、miRanda、PicTar等数据库生物学信息预测我们发现了miR-27a-3p的一个潜在靶基因BTG2。BTG2是B细胞易位基因2,是BTG基因家族成员之一,它是细胞增殖抑制基因,BTG2在胃癌细胞生长、增殖状态、细胞周期和凋亡状态和成瘤、侵袭转移能力中起着非常重要的作用。随后通过BTG2 3’-UTR荧光报告质粒的构建和双荧素酶报告基因实验,我们发现miR-27a-3p是通过靶向调控靶基因BTG2的3’UTR区域从而影响其生物学的功能。过表达miR-27a-3p下调了抑癌基因BTG2的表达,进而影响了肿瘤细胞的增殖速度和凋亡。我们通过流式细胞周期分析发现异常表达miR-27a-3p和过表达BTG2能够影响细胞周期的G1/S的细胞数目,同时发现抑制miR-27a-3p的表达或者过表达BTG2使得sub-G1期的细胞数目增多。在得到这个结果的基础上我们首先对G1/S期周期相关蛋白Cyclin D1、CyclinE进行Westem blot分析,我们发现,抑制miR-27a-3p的表达或过表达BTG2都使得细胞周期蛋白Cyclin D1、CyclinE的表达量下降,而过表达miR-27a-3p则是的Cyclin D1、CyclinE的表达量增加,由此我们可以得到miR-27a-3p靶向调控BTG2是通过影响周期相关蛋白来影响细胞周期进程,进而影响了细胞增殖,同时我们发现sub-G1期的细胞数目的显著性变化。随后通过Tunel检测了miR-27a-3p对胃癌细胞凋亡的影响,我们发现过表达miR-27a-3p使得细胞凋亡数目减少,而抑制miR-27a的表达和过表达BTG2都能够使细胞凋亡数目增多。为了进一步验证其对凋亡的影响,我们分别对凋亡蛋白caspase3和PARP1进行了Western blot分析,发现抑制miR-27a-3p的表达或过表达BTG2都使得caspase3和PARP1蛋白有显著的剪切激活。由此我们证明了miR-27a-3p靶向调控BTG2影响胃癌细胞凋亡的分子机制。C-myc是一个细胞永生基因,在细胞的增殖过程中有着非常重要的作用,我们首先通过胃癌临床病例检测C-myc mRNA的表达量并与BTG2的表达量进行了相关性分析,发现C-myc与BTG2有显著的负相关性。因为BTG2是Ras/MEK/ERK通路的一个重要的负调控基因,而C-mvc是Ras/MEK/ERK通路的下游基因,我们推测BTG2通过负调控Ras/MEK/ERK通路影响了C-myc的表达。于是我们通过Western blot方法,分析发现BTG2的过表达会抑制Ras的表达,进而减少了p-MEK和p-ERK的表达,进而抑制了下游的C-myc的表达。相反,过表达miR-27a-3p会靶向抑制BTG2的表达,进而促进了Ras/MEK/ERK通路的激活,从而上调了C-myc的表达,使得细胞的增殖能力增强。因此我们推测miR-27a将来可能成为胃癌的诊断标志物也可能被视为癌症治疗的一个有效的靶点,对于临床检验具有很大的意义。