目的：制备抗狂犬病病毒重组免疫毒素RVScFv-PE40并研究其靶向细胞毒作用。 方法:将抗狂犬病病毒糖蛋白ScFv基因克隆人表达载体PET-PE40，转化Ecoli.DH5α，经酶切及DNA序列测定鉴定重组质粒，转化表达宿主菌Ecoli.BL-21，IPTG诱导表达目的蛋白，SDS-PAGE、Western-blotting检测蛋白表达水平及特性，体外复性并经离子交换色谱柱、疏水作用色谱柱及Sphadex G200凝胶过滤层析柱纯化蛋白；间接免疫荧光染色及ELISA检测RVScFv-PE40与病毒感染细胞结合活性，MTT法检测RVScFv-PE40对病毒感染细胞的杀伤作用。 结果:限制性酶切图谱及序列分析证实成功构建了重组免疫毒素RVScFv-PE40原核表达载体，经IPTG诱导，目的蛋白获得高效表达，表达量占菌体总蛋白的32.29％，经体外复性及三步纯化，获得纯度大于94％的目的蛋白，间接免疫荧光染色及ELISA检测表明RVScFv-PE40与病毒感染细胞具有抗原结合活性，MTT试验显示，重组免疫毒素对病毒感染细胞具有较大的杀伤作用，浓度为60μg/ml的免疫毒素对病毒感染细胞的杀伤作用大于70％，而对正常细胞无杀伤作用。 结论:这种对狂犬病病毒感染细胞具有特异性杀伤作用的重组免疫毒素的制备为研究狂犬病药物提供了新的思路。