【摘 要】
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将PRRSV修饰的ORF5(MORF5)与ORF6基因分别克隆入笔者构建的改良型痘苗病毒安卡拉株(Modified vaccinia virus ankara,MVA)转移载体pLR-gpt的两个多克隆位点中,构建重组转移载体pLR-MORF5/ORF6.经脂质体介导,将构建好的重组转移载体转染感染亲本MVA 2h的BHK-21细胞单层,用药物选择性培养基(MXHAT)在24孔板上进行连续筛选纯化
【机 构】
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江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏 南京 210014 南京农业大学动物医学院
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会
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将PRRSV修饰的ORF5(MORF5)与ORF6基因分别克隆入笔者构建的改良型痘苗病毒安卡拉株(Modified vaccinia virus ankara,MVA)转移载体pLR-gpt的两个多克隆位点中,构建重组转移载体pLR-MORF5/ORF6.经脂质体介导,将构建好的重组转移载体转染感染亲本MVA 2h的BHK-21细胞单层,用药物选择性培养基(MXHAT)在24孔板上进行连续筛选纯化,得到带有筛选标记的重组病毒.将rMVAgpt-MGP5/M感染表达Cre重组酶的BHK-21细胞(BHK-Cre),获得删除筛选标记的重组病毒.PCR证明MORF5与ORF6成功插入MVA基因组中:Western-blot与IFA证明重组病毒能表达MGP5与M蛋白:重组病毒的生长特性表明与亲本MVA出现病变的时间及病毒滴度基本一致.用rMVA-MGP5/M免疫6周龄Babl/C小鼠,首免后3周可检测到特异性PRRSV中和抗体,8周后中和抗体效价可达25,并能继续维持4周:细胞因子检测结果表明,重组病毒免疫小鼠产生强烈的TH1型细胞免疫反应.结论:rMVA-MGP5/M具有良好的免疫原性,可作为预防PRRS的候选疫苗进一步研究.
其他文献
猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种急性接触性传染病,是目前危害我国养猪业发展的主要疫病之一。省兽医卫生防疫站应用ELISA等技术对全省17个种猪场进行猪瘟抗体监测,共检测631份,其中母猪509份,公猪62份,后备母猪60份,猪瘟弱毒免疫抗体阳性588份,阳性率93.91％,猪瘟强毒免疫抗体40份,阳性率6.34％。及时发现患有猪瘟的病猪和隐性感染猪瘟的不显症状猪,对猪群进行治疗或淘汰净化猪群,成为控制和
近2年猪高热病频发,人心惶惶,谈热色变,很多人打了高致病性的蓝耳苗,也没有控制住高热病的流行,甚至有些猪场打后出现了重大损失.因此,通过我们的调查分析,高热病应是在高致病性蓝耳病等病原的侵害下造成猪免疫力低下,导致感染病毒、细菌、寄生虫、霉菌毒素等综合征所致.建议通过综合防制措施予以控制猪的高热病!
2000年以后,随着免疫抑制性病原猪蓝耳病病毒(PRRSV)和猪圆环病毒(PCV)的广泛传播,猪传染病的流行特征发生很大的变化,猪瘟免疫失败,"呼吸道病复合体"(PRDC).猪高热传染病近年来严重影响我国养猪业健康发展,并构成了一种背景疾病,本文通过对我国猪传染病发生的历史回顾,探索发病根源,提出猪瘟控制的核心是免疫,蓝耳病的控制要用疫苗免疫,细菌病、气喘病与圆环病毒感染不可忽视,而猪传染病控制的
2006年夏季发生、波及全国多个省份的"猪高热病"(农业部公布为高致病性猪蓝耳病变异毒株所致),给许多农村养殖户和规模猪场造成了重大损失.2006年8月至2007年底,受有关单位邀请,笔者以"猪高热病在规模猪场的发生特点及防控技术"为题,在广东河源、湖北宜昌、辽宁丹东、陕西西安、河北石家庄、廊坊、保定、邯郸和唐山及河南省各地,共举办了56场(次)的技术讲座.有关"猪高热病"的发病特点.临床症状及病
2006年夏季以来发生的猪高热病,影响了湖南省数十个县市,造成了重大经济损失。总结防控猪高热病的一些经验教训有很多,其中“病性不清,防治茫然”是一个重要方面。为便于诊断分析,首先从该病基本情况的回顾开始。本文介绍了流行病学特点，阐述了猪高热病的临床症状，分析了解剖变化，探讨了检验与诊断的方法。
生猪“高热性病”,自2005年7月份开始,近三年来,每到7月中旬就在我们地区暴发,该病传染速度快,播及面广,给农民养猪带来了很大的损失,特是今年,由于气温偏高,病情复杂,本地区发病率高达90％以上,死亡率在20-80％。为了加强猪高热性病的防治,加强广大农民对生猪高热病的认识,本文就该病的发生情况和防治方法进行了总结，浅谈了治疗体会。
应用建立的两个多重PCR方法,对2005-2006年收集于江苏地区的211份猪高热病疑似病料进行检测,结果PRRSV阳性率为51.2％;PCV阳性率为44.1％:CSFV阳性率为10.4％;PPV阳性率为3.9％:PRV阳性率为2.4％.同时发现,2005年病料中PCV2的阳性率为21.2％,2006年为73.2％;2005年PRRSV的阳性率为38.1％,2006年为67.7％.2006年猪高热
从2006年9月-2008年5月河南省发生猪高热综合征的113家规模化猪场222头病死猪的153份肺、54份关节液、66份心血、5份脑,8份脾脏、4份淋巴结和1份脓汁共291份病料中分离致病性细菌.通过培养特性试验、生化试验、PCR、毒力试验、血清学试验鉴定了246株主要的致病细菌,其中大肠杆菌75株,链球菌125株,沙门氏菌6株,巴氏杆菌16株.波氏杆菌14株,副猪嗜血杆菌10株.对其中的沙门氏
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通过考察中草药提取物对猪生殖和呼吸系统综合征病毒在传代细胞MARC-145细胞中增殖的影响,证明中草药提取物具有抑制病毒增殖作用.结果表明,中草药提取物能够显著抑制PRRSV体外增殖,时PRRSV的最小直接杀灭浓度为5％.