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目的:采用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术和分子克隆技术克隆人FasL基因片段,制备互补核糖核酸(cRNA)探针,采用原位杂交方法观察FasL mRNA在肺癌组织细胞中的表达分布情况,并探讨其临床意义.方法:分离健康人外周血单核细胞(PBMC),用植物血凝素-P(PHA-P)激活,诱导FasL基因表达,用人全血总RNA提取试剂盒(QLAamp RNA Blood Mini kit)提取总RNA,特异性引物反转录制备,聚合酶链反应扩增FasL基因片段,定向克隆入质粒pSPT19中,转化感受态大肠杆菌JM109,经氨苄青霉素抗性筛选获取有重组质粒的阳性转化子,插入的FasL互补脱氧核糖核酸(cDNA)经DNA测序确认,PstⅠ线性化重组质粒,经SP6聚合酶体外转录制备地高辛标记的FasL cRNA探针(Dig-FasL cRNA).收集青岛大学医学院附属医院胸外科手术切除的肺癌标本(经病理证实)于无菌E<,p>管中,经液氮速冻,转移至-70℃冰箱备用,标本经处理后制备成肺癌冰冻切片,厚度6μm,在切片上用cRNA探针进行原位杂交,观察FasL mRNA的表达分布情况.结果:DNA测序证实重组质粒中插入的FasL序列准确无误;Dig-FasL cRNA探针经标记效率检测,标记效率满意;镜下肺癌细胞胞浆中可检测到蓝紫色杂交信号,表明有FasL mRNA的表达.结论:FasL基因的克隆化成为肺癌细胞凋亡研究的工具;地高辛标记的FasL cRNA探针为进一步研究FasL mRNA在肺癌细胞中的表达分布提供了有效手段;FasL作为促凋亡基因与肺癌的发生、发展有重要关系.