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目的:基于慢病毒介导的转基因方法制备红色荧光蛋白(mRFP)转基因小鼠以建立基于该转基因方法制作转基因小鼠的技术平台。
方法:将携带mRFP基因的慢病毒注射入ICR小鼠单细胞受精卵卵周隙以感染受精卵,胚胎移植进假孕母鼠以获得仔代小鼠,然后应用小动物活体成像仪、体视荧光显微镜和PCR等鉴定并获得mRFP 转基因鼠。
结果:移植卵周隙注射有慢病毒的胚胎40枚给2 只假孕母鼠,共获得仔鼠6 只;利用体视荧光显微镜检测mRFP 表达,在蛋白水平证实6只F0代中,2 只(R3和R4) 鼠耳和胡须高表达mRFP,其余的弱表达mRFP(R1、R2和R5)或荧光强度(R6)与野生型ICR小鼠无明显差别,而DNA 水平检测证实,6 只F0代中,5 只(R1、R2、R3、R4和R5)基因组中整合有外 源转基因hUbmRFP,预示基因型鉴定结果很好验证了体视荧光显微镜鉴定结果。
结论:本实验室建立 了基于慢病毒法快速制备转基因小鼠的技术平台,这为针对不同基因建立相应转基因小鼠以实现恒定或条件性的转基因过表达或RNA干涉(RNAi),并进而在体内解析相应基因功能和建立人类疾病模型等奠定了坚实基础。