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目的:建立小鼠血清中弓形虫peroxiredoxin(Prx)抗原的间接EIASA检测方法。
方法:应用棋盘滴定法确定最佳被检血清浓度、抗体浓度、酶标二抗浓度。确定封闭液对结果的影响,绘制蛋白定量标准曲线,对建立的间接EL,ISA法进行验证,并对30份弓形虫感染小鼠血清及30份正常小鼠血清进行检测。
结果:间接ELISA的最佳条件为:被检血清最适包被浓度为1:50,大鼠抗弓形虫血清最佳稀释度为1:100(效价1:128),酶标二抗的最佳稀释度为1:4 000。封闭剂对实验结果的影响不大。该方法灵敏度较高,重复性较好,特异性较强,检测30份弓形虫感染小鼠血清的检出率为100%。
结论:已建立了检测小鼠血清中弓形虫Prx抗原的间接ELISA法,可用于弓形虫病的诊断及流行病学调查。