【摘 要】
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根据GenBank上已发表的鸡IL-18基因核苷酸序列,设计合成了一对扩增跨幅约600bp的引物,并提取鸡脾细胞的总RNA,进行一步法RT-PCR扩增,即将反转录和PCR反应在一个PCR反应管中一次性完成;将PCR扩增片断克隆到pGEX-T easy vector,获得长约600bp的chIL-18cDNA基因,序列分析与文献报道基本一致.结果表明,一步法RT-PCR特异性好,敏感性高,简单快速,
【机 构】
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河南农业大学农业生物技术重点开放实验室(河南郑州) 河南农业大学农业生物技术重点开放实验室(河南郑
【出 处】
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中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会
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根据GenBank上已发表的鸡IL-18基因核苷酸序列,设计合成了一对扩增跨幅约600bp的引物,并提取鸡脾细胞的总RNA,进行一步法RT-PCR扩增,即将反转录和PCR反应在一个PCR反应管中一次性完成;将PCR扩增片断克隆到pGEX-T easy vector,获得长约600bp的chIL-18cDNA基因,序列分析与文献报道基本一致.结果表明,一步法RT-PCR特异性好,敏感性高,简单快速,重复性好,可节省试剂和时间,值得推广应用.本试验通过RT-PCR一步法成功克隆了鸡IL-18基因,为制备chIL-18基因工程产品及研究其多种生物学作用奠定了基础.
其他文献
本实验通过对鸭胚尿囊腔接种,对我国几个省市采集的死于疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织进行病原分离,获得9个病毒分离株.这些分离株对10日龄鸭胚的致死率为100﹪,人工感染6日龄雏鸭的致死率为0-100﹪不等.死亡鸭呈角弓反张姿势,剖检可见肝脏肿大,有出血点或出血斑.将9株分离株经鸭胚传至第5代,收集鸭胚尿囊液毒测定这些毒株的ELD为10/0.2ml~10/0.2ml不等.用鸡抗1型DHV及新型DHV的
2003年5~6月间,新疆某信鸽群暴发了发病急、死亡率高的疫情,经病原分离和鉴定证明,该疫病是由新城疫病毒引起.分离的毒株经毒力测定ELD=10/0.1ml,用分离的毒株对13日龄的非免疫鸡进行攻毒试验,可致40﹪的鸡死亡.
近年来,新疆地区在养鸡业发展的带动下,其它家禽的养殖例如肉鸽、鸭、鹅、鸵鸟等其它家禽养殖业也得到迅猛发展,养殖数量迅速扩大,在天山南北均出现大中型养鸭场和养鹅场.与此同时,在禽病的流行方面,除了原有的鸡的传染病病严重流行外,鸽、鸭、鹅等家禽的疾病也开始在新疆流行,给养殖业造成严重危害和经济损失.自1999年以来,对新疆不同地区送检病死禽进行了剖检、病料采集、病原分离和诊断等工作,共计诊断肉鸡养殖场
随机抽样临床禽病确诊病例375份,其中新城疫及混合感染病例230份,且随季节变化呈正态分布趋势.分别于7d、21d、35d、63d接种HB1+H、Lasota+H52、Lasota+H52、Mukteswer免疫程序能够提供72.3﹪的保护力.特异性IgG与聚肌胞等组合治疗方法有效率最高达92﹪.
鸡新城疫又称亚洲鸡瘟,它是由副粘病毒引起的鸡的一种急性、高度接触性传染病.99年以来,在很多养鸡密集地区,新城疫的发病率较高;主要流行新城疫基因Ⅶ型毒株,发病情况较以前有较大的变化;发病主要集中在3-10天、25天后的肉仔鸡和20-40天、180-350天的产蛋鸡群.
用高致病性禽流感病毒H5亚型(HPAIV H5)人工感染SPF鸡、肉鸡,采集发病死亡鸡心、肝、脾、肺、肾、胸肌、腿肌、气管、骨髓、直肠,分别采用荧光RT-PCR和鸡胚病毒分离培养方法对其病毒含量进行检测.结果表明:所取组织脏器均检出HPAIV H5,其中以肾脏含毒量最高.通过该试验数据不仅可以了解各组织脏器中病毒分布状况,为进出口贸易、国内鸡肉产品检测提供最佳的采样、监管模式,同时为疫病的诊断提供
从鹦鹉的肝脏中采集病料,经选择培养,革兰氏染色,镜检.生化实验,动物实验,因子血清型鉴定,药敏实验等,证明分离到的具有很强致病性的大肠杆菌,血清型为086:K61K62,对阿米卡星,卡那霉素,头孢氨苄等抗生素最敏感,可做为防止鹦鹉大肠杆菌病的首选药物.
上海某动物园饲养的一批鹦鹉、松鸦、乌鸡发生以精神沉郁、食欲下降,喜卧、拉绿色稀粪为特征的疾病,死亡率达50﹪以上,通过病毒的分离培养、鸡胚接种试验、半数致死量试验、血凝试验(HA)和血凝抑制试验(HI),结果证明从病死鹦鹉、松鸦、乌鸡体内分离到的病毒为H9亚型禽流感病毒.
本研究从野生禽类鹧鸪的喉气管拭子中分离到1株冠状病毒,命名为Partridge/GD/S14/2003,简写为S14.通过RT-PCR扩增、克隆测序获得了该毒株的全基因组序列,序列经DNAstar分析发现,S14毒株与肾型毒株JX1-99、TJ2-96 S1基因同源性最高,分别达到94.6﹪和93.4﹪,并且该毒株的S1基因还和QXIBV、LX4株也存在高度亲缘性,分别达到85﹪和84.3﹪,同时
用血清学、生物学方法,从一群病死鹅中分离到一株鹅副粘病毒(GPMV);血清学鉴定表明该分离病毒为禽副粘病毒-Ⅰ型(PMV-Ⅰ);毒力测定显示分离病毒GPMV毒力与鸡F48E9毒株的毒力相似;F基因裂解位点序列的分析表明该分离病毒GPMV融合蛋白F裂解位点氨基酸序列为112K-R-Q-K-R-F117.分离病毒GPMV攻击不同新城疫(ND)抗体水平的雏鸡、蛋鸡和鹅,结果显示分离病毒GPMV与鸡ND强