【摘 要】
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目的 葡萄糖调节蛋白78(GRP78)是内质网应激标志性蛋白.本实验探讨了肝癌细胞内质网应激与活性氧簇(ROS)生成的相关性,以及固有型雄甾烷核受体(CAR)在其中的作用.方法 采
【机 构】
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北京大学医学部基础医学院药理系,北京 100191
【出 处】
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第十届全国药物和化学异物代谢学术会议暨第三届国际ISSX/CSSX联合学术会议
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目的 葡萄糖调节蛋白78(GRP78)是内质网应激标志性蛋白.本实验探讨了肝癌细胞内质网应激与活性氧簇(ROS)生成的相关性,以及固有型雄甾烷核受体(CAR)在其中的作用.方法 采用阳离子脂质体法将携带外源性雄甾烷核受体(CAR)基因的质粒载体转染人肝癌HepG2细胞并使之稳定表达为mCAR-HepG2细胞株；用实时定量PCR法检测基因表达水平,流式细胞仪结合二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)探针检测细胞内活性氧簇(ROS)生成.结果 小檗碱在0.5、1、5、10、25μM浓度范围内,与HepG2细胞共孵育6、12、24、48h后,可时间依赖性和剂量依赖性地促使GRP78基因表达水平增高,尤其在小檗碱(5～25 μM)作用24 h和48 h后,与同时间点对照组相比,GRP78表达水平的增加具有显著差异性(P＜0.05).而小檗碱对mCAR-HepG2细胞作用未见显著差异.CAR诱导性配体CITCO(1μM)、TCPOBOP (0.25 μM)作用后未见显著性影响.与6h时间点各组相比,mCAR-HepG2细胞在培养24 h后,可见ROS生成水平显著性增高(P＜0.05),而HepG2细胞各组ROS则未见显著时间依赖性改变.与同时间点对照组相比,小檗碱(25、50 μM)在24 h时间点可使HepG2细胞内ROS生成显著性增高(P＜0.05),而TCPOBOP (0.25 μM)与CITCO(1 μM)对ROS生成则均未见显著性影响.结论 GRP78基因表达与ROS生成具有一定相关性,核受体CAR是否参与该过程尚需进一步实验证实.
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