氨基糖苷类抗生素耐药机制及耐药性检测芯片的研究

被引量 : 0次 | 上传用户:Melaniemei
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
【目的】本研究拟调查氨基糖苷类抗生素钝化酶基因、16S rRNA甲基化酶基因及整合酶基因在广东省各地区兽医临床细菌中的流行情况,并尝试将生物传感器技术与传统基因芯片技术相结合构建生物传感器芯片对aac(3)-Ⅱc、aac(6’)-Ⅰb、aadA1、aadA2、aph(4)-Ⅰa、rmtB、intI1、intI2 8种耐药基因进行检测。【方法】采用微量肉汤二倍稀释法对515株畜禽大肠杆菌进行6种氨基糖甘类抗生素敏感性分析:通过PCR扩增、序列分析检测氨基糖苷类钝化酶基因、16S rRNA甲基化酶基因及整合酶基因,并用建立的PCR方法调查各基因在515株畜禽大肠杆菌中的流行分布情况:针对aac(3)-Ⅱc、oac(6’)-Ⅰb、aadA1、aadA2、aph(4)-Ⅰa、rmtB、intI1、intI2等8种基因设计捕获探针,均为寡核苷酸探针,构建耐药性检测生物传感器芯片。通过生物素化的引物PCR扩增制备8种标记探针,与芯片在一定温度下杂交。利用多重PCR法制备标记探针与芯片杂交。【结果】药物敏感性分析结果表明,515株大肠杆菌对6种抗生素的耐药率从高到低依次为链霉素53.98%、卡那霉素40.78%、庆大霉素33.01%、大观霉素31.65%、新霉素29.32%、阿米卡星8.93%,各药耐药率随着时间推移有逐渐增高的趋势:515株大肠杆菌中对6种氨基糖苷类都敏感的菌株占30.29%,1耐、2耐、3耐、4耐、5耐、6耐株分别为19.42%、13.40%、13.59%、10.49%、8.16%、4.66%,共有38种多重耐药谱型。耐药基因流行分布调查结果显示,515株大肠杆菌中未检测到aac(3)-Ⅰa、aph(2’)-Ⅰb基因,其余10种氨基糖苷类钝化酶基因检出率从高到低依次是aph(3’)-Ⅶ(97.28%)、aph(3’)-Ⅱ(94.17%)、aadA2(71.07%)、aadA1(58.84%)、aac(3)-Ⅱc(39.61%)、aac(3)-Ⅳ(37.28%)、aph(4)-Ia(31.84%)、aph(3’)-Ⅳ(16.70%)、aac(6’)-Ⅰb(15.34%)、aadB(2.52%):515株大肠杆菌中有27株检测到16S rRNA甲基化酶rmtB基因,检出率为5.24%:整合酶intI1、intI2基因的检出率分别为75.92%、3.69%:构建的生物传感器芯片杂交结果表明:60℃是芯片杂交的最佳温度;8种探针特异性好,无交叉反应,对检测的耐药基因具有有效性:芯片的灵敏度为3pg/μL DNA模板浓度:芯斤重复性好、稳定性高,能检测多种基因的混合样品:确定了3组多重PCR体系,通用退火温度为51℃,能对8种基因进行有效扩增,制备的标记探针能与芯片发生有效杂交。【结论】氨基糖苷类耐药酶基因谱型错综复杂,13种耐药基因共有127种组合方式,以aadA1+aadA2aph(3’)-Ⅱ+aph(3’)-Ⅶ四种基因的联合方式最为常见。515株大肠杆菌耐药表型和钝化酶基因谱型关系复杂,总体趋势上一致,但未能完全对应。构建的生物传感器芯片杂交信号明显,肉眼清晰可见,无需配备专门的仪器设备进行观察,适宜于兽医临床推广。
其他文献
利用风叶的相关气动数据和复合材料参数在ANSYS软件中对风叶进行了实体建模,并对风叶进行了模态分析,取出了其前六阶振型,为风叶的进一步动力学分析提供了依据。
随着全球化与城镇化的持续加速推进,同城化被视为推动经济发展,协调社会、经济、环境持续发展的先进方式和提升区域竞争力的重要手段。西咸同城化作为国内目前的重要的规划实
将TRIZ发明问题解决理论应用于ICNI故障诊断研究中,在分析飞机上ICNI故障诊断工作中存在问题的基础上,提出基于TRIZ原理的分析问题思路和解决方案。设计的ICNI机上故障原位诊
高校体育社团对高校体育教育事业的发展起到了一定的补充与完善作用,因此重视高校体育社团的建设与发展,对于学校体育事业的全面发展意义重大。体育社团的建立既满足了学校体
目的:本课题通过观察多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者抗苗勒氏管激素(Anti-Müllerian hormone,AMH)的特点、中医体质的分布规律、本病的影响因素,探究A
<正>危急值(critical value)是指某些检验结果出现异常时,如过高或过低,可能危及患者生命的检验数值[1]。当这种检验结果出现时,患者可能正处于危险的边缘状态,此时应迅速将
会议
目的探讨流感病毒(H1N1)感染血管平滑肌细胞后,血管平滑肌细胞的数量、增殖率、凋亡率及分泌相关细胞因子的变化,从细胞水平探讨流感病毒感染在动脉粥样硬化形成中的作用以及
目的探讨特发性卵巢早衰(POF)患者的骨量变化及其影响因素。方法选择特发性POF患者42例,对照组健康女性60例,测定2组的体质量指数、血清雌二醇(E2)等性激素水平及腰椎、股骨颈骨