FCCP对成熟脂肪细胞胰岛素敏感性和线粒体功能损伤的影响

来源 :中华医学会第十八次全国儿科学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:a630939408
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目的:观察线粒体氧化磷酸化解偶联剂----羰基-氰-对-三氟甲氧基本腙(Cyanide p-trifluoromethoxyphenyl-hydrazone,FCCP)对成熟脂肪细胞胰岛素敏感性及线粒体功能的影响.方法:以3T3-L1前体脂肪细胞为研究对象,经1-甲基-3-异丁基黄嘌呤(3-isobutyl1-methyxanthine,MIX)、地塞米松、胰岛素方案诱导分化为成熟脂肪细胞,给予7.5μM FCCP干预分化成熟的3T3-L1脂肪细胞12h后,采用3H标记的2-脱氧葡萄糖检测成熟脂肪细胞的基础、胰岛素刺激下葡萄糖摄取率;采用Western Blot检测葡萄糖转运体4(GLUT4)的表达及转位,同时检测胰岛素信号转导通路中相关信号分子IRS-1、AKT的总蛋白水平及磷酸化水平;采用电子显微镜观察线粒体形态改变;荧光定量PCR技术检测线粒体DNA拷贝数;生物发光法检测细胞ATP含量;应用JC-1、DCFDA(2,7-Dichlorofluorescein diacetate,DCFDA)荧光染料预染成熟脂肪细胞,流式细胞仪观察线粒体膜电位及细胞活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的变化.结果:(1)FCCP干预成熟脂肪细胞后降低胰岛素刺激下的葡萄糖摄取,但基础葡糖糖摄取无显著改变;(2)FCCP干预抑制成熟脂肪细胞胰岛素刺激下的IRS-1、AKT磷酸化活性,减少GLUT4由胞浆向胞膜的转位;(3)FCCP干预成熟脂肪细胞后,线粒体出现嵴断裂、减少、消失,部分线粒体肿胀,甚至呈空泡状等形态学变化;(4)FCCP显著下调成熟脂肪细胞中线粒体DNA拷贝数;(5)FCCP显著下调成熟脂肪细胞中线粒体的膜电位、ATP水平,其成熟脂肪细胞中ROS水平明显增高.结论:FCCP导致脂肪细胞线粒体形态异常、功能损伤及胰岛素敏感性降低,提示FCCP损害成熟脂肪细胞的胰岛素敏感性可能与FCCP引起的ROS水平增高有关.
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