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目的固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)是存在于内质网的细胞内胆固醇敏感器,也是固醇调节元件结合蛋白(SREBP)的锚定蛋白,在调节细胞内胆固醇水平中起着非常关键的作用。细胞通过调控SCAP从高尔基体往内质网的转位从而维持胞内胆固醇水平的稳定状态。我们的前期研究证实炎症能引起人肾系膜细胞(HMCs)的脂质积聚,伴随有SCAP的表达增加。为进一步探讨其可能机制,本课题构建了质粒pcDNA-SM22-SCAP(D443N)并转染HMCs,探讨SCAP过表达是否能引起细胞内的脂质异常积聚,及其分子机制。方法构建质粒pcDNA-SM22-SCAP(D443N),并转染至HMCs。用油红O染色和酶学方法分析细胞内的胆固醇含量,用real-time PCR来检测细胞内的SCAP、LDLR和HMGCoA还原酶的mRNA水平,用Western-blot和免疫组化技术分析上述基因及核内SREBP2蛋白的表达。用激光共聚焦技术鉴定SCAP蛋白在细胞内高尔基上的定位。结果油红O染色和细胞内胆固醇测定证实:LDL能够增加HMCs的脂质水平(4.3±1.2μg/mg vs 5.5±1.4μg/mg,P<0.05),然而在LDL存在下SCAP过表达的HMCs内脂质积聚进一步增加,胆固醇含量增高加剧(5.5±1.4μg/mg vs 7.8±1.7μg/mg,P<0.05)。在对照组HMCs(转染pcDNA3.1)中,200μg/ml的LDL能够降低SCAP、LDLR和HMGCoA还原酶的mRNA和蛋白的表达,特别是细胞核内有活性的SREBP2片段的表达。而在转染SCAP的HMCs中,上述各基因和蛋白的表达均明显增加,尽管在LDL存在条件下,LDL的生理性抑制作用被打破,上述各基因和蛋白表达不下调。通过共聚焦显微镜发现SCAP过表达导致了SCAP从内质网向高尔基体异常转位。结论SCAP的过表达完全打破了细胞内胆固醇(LDL)对靶基因的生理性抑制,促使了靶基因的异常表达,导致了胆固醇在肾系膜细胞内的聚集。