【摘 要】
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提取血清1型鸭疫里默氏杆菌(RA)CH-1株基因组DNA,采用限制性内切酶Sau3A Ⅰ进行部分酶切消化,纯化回收1.0kb-6.5kb片段,将其用T4 DNA连接酶与经BamH Ⅰ酶切并去磷酸化的ZAP E
【机 构】
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四川农业大学动物科技学院禽病防治研究中心,625014
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第八次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛
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提取血清1型鸭疫里默氏杆菌(RA)CH-1株基因组DNA,采用限制性内切酶Sau3A Ⅰ进行部分酶切消化,纯化回收1.0kb-6.5kb片段,将其用T4 DNA连接酶与经BamH Ⅰ酶切并去磷酸化的ZAP Express载体进行连接,用噬菌体包装蛋白包装.经测定包装滴度为5.23×106 pfu/ml,蓝白斑筛选重组率为96.8％,成功构建了血清1型RA CH-1株基因组文库.在此基础上以兔抗RA血清为抗体探针进行具有免疫原性蛋白的基因筛选,获得3个阳性克隆,经多次重复筛选后再进行体内删除,得到一含插入片段的质粒并测序,对所得的序列(GenBank登录号:DQ151838)进行生物信息学分析,结果显示该序列含有一长度为369个氨基酸的完整开放阅读框架,是一尚未见报道的RA基因序列,并且存在多个预测的抗原表位,是潜在的基因工程疫苗的候选基因.
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