【摘 要】
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目的：本文拟通过体外实验证实该假说：TBBz通过抑制CK2磷酸化,进而影响hLa功能,下调HBV复制与表达.方法：人肝脏组织标本中的磷酸化La蛋白(pLa)和总La蛋白含量采用免疫组化方法测定.采用TBBz干预HepG2.2.15细胞(一种稳定表达HBV的细胞系),同时检测细胞活性.hLa和CK2分别由其特异性siRNA抑制,hLa的366丝氨酸突变为丙氨酸的突变质粒hLa Ala366也加入系统
【机 构】
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上海交通大学附属第一人民医院药学部,上海 美国南卡罗纳多医科大学分子生物实验室,查尔斯顿,美国
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目的：本文拟通过体外实验证实该假说：TBBz通过抑制CK2磷酸化,进而影响hLa功能,下调HBV复制与表达.方法：人肝脏组织标本中的磷酸化La蛋白(pLa)和总La蛋白含量采用免疫组化方法测定.采用TBBz干预HepG2.2.15细胞(一种稳定表达HBV的细胞系),同时检测细胞活性.hLa和CK2分别由其特异性siRNA抑制,hLa的366丝氨酸突变为丙氨酸的突变质粒hLa Ala366也加入系统.HBV DNA和HBsAgHBeAg表达水平分别通过荧光PCR和微粒子酶免疫分析法测定.结果：人肝脏组织芯片的乙肝阳性标本中磷酸化La蛋白(pLa)大量表达.TBBz下调pLa水平,同时检测到HBV表达量下降.在siRNA干预的细胞中,突变体hLa Ala366干预伴随着显著的病毒表达水平降低.采用siRNA抑制CK2以后,检测到HBV相关指标下降.结论：hLa在调节HBV基因表达方面有重要作用,实验证据表明,hLa很可能是依赖于CK2磷酸化激活其366位丝氨酸而发挥功能.
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