聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是体外快速扩增DNA的方法,在基因表达、单核苷酸多态性及其突变分析,临床医学诊断、法医鉴定、检疫检验等领域有着重要应用。微流控PCR不仅节约空间和试剂、热容量小、升降温速率快,而且具有结构微型化和功能集成化等显著优势。集成核酸提取的PCR微流控芯片,将核酸提取、PCR扩增与检测进行整合,可实现核酸检测过程的全自动与全封闭,不仅大大缩短了反应时间,简化了操作步骤,而且可消除目前PCR过程可能存在的交叉污染,达到POCT需求的"样品进-结果出"的目标[1-2]。本文研究了基于硅胶模法[3-4]的芯片上核酸提取方法。采用软光刻法制备了基于SU-8 2150光刻胶的集成核酸提取微流控芯片阳极膜,使用注塑法生成PDMS基片,通过等离子体键合封装成所需的芯片。硅胶模法提取核酸的过程包括裂解、吸附、清洗和洗脱,芯片上集成了预处理腔、提取腔、混合腔、废液腔、反应腔以及储存腔,采用独特的微阀、微泵对微流体进行精确控制和驱动。基于此芯片对人全血中DNA甲基化转移酶DNMT3A基因进行了提取实验,首先使用微泵驱动提取腔中的裂解液通过硅胶模,使DNA吸附在硅胶模上,再驱动清洗液洗去蛋白等杂质,最后将DNA从硅胶模上洗脱下来驱动到PCR反应腔进行扩增。我们利用自主研发的微流控实时荧光PCR分析平台[5]进行了实验验证,通过PCR扩增曲线和融解曲线分析,结果表明两次微流控实时荧光PCR实验均获得成功,实现了芯片上样品核酸的自动提取、扩增与检测。下一步将继续深入研究影响芯片上核酸提取效率的关键因素,优化微流控PCR的各项实验参数,开展定量化实验研究。