论文部分内容阅读
目的:探索MKK7基因罕见变异与肺癌发病及进展的关系,阐明其生物学机制。方法:参考dbSNP公共数据库,经生物信息学分析,最终选取5个位于MKK7基因编码区罕见(低发等位基因频率<5%)多态位点,分别是rs28395770G>A(p.Glu116Lys)、rs56316660A>G(p.Asn118Ser)、rs56106612C>T(p.Arg138Cys)、rs55800262G>A(p.Ala195Thr)和rs1053566 C>T(p.Leu259Phe)。通过两阶段三人群(包括发现关联人群:1559病例和1679对照)、验证关联人群Ⅰ:1949病例和1957对照、验证人群Ⅱ:1508病例和1545对照)的大样本,利用DNA直接测序法检测上述罕见SNPs的基因型。针对所发现的阳性关联位点,MKK7 p.Glu116Lys罕见多态,构建含不同等位基因的慢病毒过表达载体,稳定感染人肺细胞系A549,利用MTT、细胞周期和凋亡、集落形成实验、Transwell、建立裸鼠成瘤模型等一系列体内外功能实验,分析MKK7罕见变异对肺癌发生发展的影响;并通过对含不同MKK7等位基因的A549过表达细胞株进行基因表达谱测序,探讨其具体生物学实质。结果:在5016例肺癌病例和5181例对照人群中,以rs28395770GG(116Glu/Glu)纯合基因型携带者为参照,P.116Lys变异基因型携带者(Lys/Glu+Lys/Lys)发生肺癌的风险增加了229%(OR=3.29,95%CI=2.70-4.01)。P.Glu116Lys变异还与肺癌的肿瘤分期相关(r=0.104,P<0.001),p.116Lys变异基因型能显著增加肺癌发生转移的概率(P<0.05)。过表达MKK7-116Lys蛋白的细胞可促进肿瘤细胞生长、增殖、转移和侵袭;裸鼠动物试验表明该罕见变异能促进肺肿瘤生长和体内转移。P.Glu116Lys罕见变异与肺癌发病、临床进展显著相关。结论:MKK7基因p.Glu116Lys罕见变异是影响肺癌发病及进程的独立因素,能显著增加肺癌发病及肿瘤转移的风险,提示p.Glu116Lys罕见多态可作为人群肺癌易感性及肿瘤进展的生物标志物。