【摘 要】
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以正常草鱼肝细胞为研究对象,建立草鱼脂肪变性肝细胞离体培养模型,比较不同浓度的脂肪乳剂(LE)和胎牛血清(FBS)对草鱼营养性肝细胞脂肪变性模型的影响,筛选出了最佳诱导剂及浓度,并分析20％的脂肪乳剂引起草鱼肝细胞脂肪变性的可能作用机理.采用20％脂肪乳剂0.5-2 ml/L和含20％、50％胎牛血清的培养基孵育草鱼肝细胞48h后,通过油红O染色提取定量分析肝细胞内的TG含量,倒置显微镜观察脂滴积
【机 构】
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华中农业大学水产学院,湖北武汉430070;河南师范大学水产学院,河南新乡453007 华中农业大
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以正常草鱼肝细胞为研究对象,建立草鱼脂肪变性肝细胞离体培养模型,比较不同浓度的脂肪乳剂(LE)和胎牛血清(FBS)对草鱼营养性肝细胞脂肪变性模型的影响,筛选出了最佳诱导剂及浓度,并分析20％的脂肪乳剂引起草鱼肝细胞脂肪变性的可能作用机理.采用20％脂肪乳剂0.5-2 ml/L和含20％、50％胎牛血清的培养基孵育草鱼肝细胞48h后,通过油红O染色提取定量分析肝细胞内的TG含量,倒置显微镜观察脂滴积聚情况,透射电镜观察脂变肝细胞超微结构的变化,试剂盒检测细胞培养上清ALT、AST活性,实时定量PCR检测脂代谢关键基因(PPARα、PPARγ、SREBP-1c、LPL、Lep、UCP2和UCP1)的转录水平变化.结果表明,含1-2 ml/L LE的诱导液和含20％、50％FBS的诱导液均可建立草鱼营养性脂肪肝细胞模型,含1-2 ml/L LE的诱导液组和20％FBS的诱导液组与对照组相比TG含量均显著上升(P＜0.05),而这两诱导剂组的TG含量无差异(P＞0.05),且20％浓度FBS和各浓度LE诱导组的转氨酶活性和对照组相比差异不显著(P＞0.05).在肝细胞脂变模型中PPARγ、SREBP-lc,LPL等脂代谢基因的表达量显著升高(P＜0.05),而Lep基因表达量显著降低(P＜0.05).结论：采用1-2ml/L LE和20％的FBS可以在短时间内建立草鱼肝细胞脂肪变性模型,考虑经济成本和以较低浓度为原则,含1ml/LLE的诱导液为草鱼肝细胞脂肪变性最佳诱导浓度,且肝细胞内脂质的蓄积与PPARγ、SREBP-1c、LPL及Lep等的表达变化密切相关.
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