从克隆的cDNA拯救重组的狂犬病病毒街毒株

来源 :第十次全国生物制品学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xybcn960
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利用分子克隆的方法,将中国狂犬病病毒街毒株HN10全基因组分为4个片段,按照它们在基因组上的顺序依次克隆到真核表达载体pVAX1上,并将G-L间隔区的非编码区替换为表达绿色荧光蛋白(CFP)的核苷酸,构建出表达GFP的重组狂犬病病毒HN10株全长基因cDNA真核表达质粒;同时,在全长cDNA的两侧嵌入锤头状核酶(HarnRz)和丁型肝炎病毒核酶(HdvRz)的序列,并置于CMV启动子的控制下,构建出全长cDNA真核表达质粒。 同样利用分子克隆的方法将HN10的N、P、G和L基因分别克隆到真核表达载体pVAX1上,构建出4个cDNA真核表达质粒。这些质粒即狂犬病病毒反向遗传系统所需的辅助质粒。构建出所需的全长基因组真核表达质粒和编码N、P、G和L蛋白的四个辅助质粒后,将它们以一定的比例共同转染BHK-21细胞,通过DFA试验和RT-PCR试验证实所拯救出的狂犬病病毒即为预期的重组狂犬病病毒。
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