FK228生物合成基因簇中LysR家族转录调控因子DepR结合区域的确定

来源 :中国化学会第十一届全国天然有机化学学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fenghuirong
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  目的:寻找FK228生物合成基因簇dep中LysR家族转录调控蛋白DepR的结合位点.方法:将N端带有His标签的重组蛋白DepR在大肠杆菌中进行表达和纯化.PCR扩增dep基因簇中的基因间隔区域.通过凝胶阻滞实验确定重组蛋白DepR是否与其结合.结果:在dep基因簇中并没有发现DepR的结合区域,而基因簇下游与FK228生物合成无关的基因orf21(编码MinC同源蛋白,可能参与细胞分裂)的启动子区域可以被DepR识别结合.结合位点逐步缩小到77 bp区域,该区域包含几个LysR家族结合位点的特征序列5-T-N11-A-3,以及一个与大肠杆菌中OxyR结合位点(5-GATAGBYHWDRVCTATC-3)相似的DNA序列5-ATAG-N7-CTAT-3.突变蛋白DepR(C199T)失去了结合这个77 bp靶点的能力.结论:调控蛋白DepR结合位点目前已经发现,为进一步研究其调节机制及其功能应用奠定基础.
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