【摘 要】
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目的 探讨活性氧(ROS)介导ERK/NF-κB调控miR-21在砷所致细胞恶性转化中的作用及其分子过程.方法 亚砷酸钠(NaAsO2) 1.0 μmol· L-1处理人胚肺成纤维(HELF)细胞30代后,用CCK-8检测细胞增殖情况；用软琼脂集落形成实验和迁移实验检测细胞恶性程度和迁移能力；用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测不同恶性程度HELF细胞miR-21水平和ERK,N
【机 构】
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南京医科大学公共卫生学院卫生毒理学系,现代毒理学教育部重点实验室,江苏南京211166;江苏省疾病预防控制中心毒理与功能评价研究所,江苏南京210009
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目的 探讨活性氧(ROS)介导ERK/NF-κB调控miR-21在砷所致细胞恶性转化中的作用及其分子过程.方法 亚砷酸钠(NaAsO2) 1.0 μmol· L-1处理人胚肺成纤维(HELF)细胞30代后,用CCK-8检测细胞增殖情况；用软琼脂集落形成实验和迁移实验检测细胞恶性程度和迁移能力；用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测不同恶性程度HELF细胞miR-21水平和ERK,NF-κB(p65),c-Jun蛋白及其磷酸化水平；然后观察转染miR-21 mimics或转染anti-miR-21对低水平NaAsO2所致不同恶性程度HELF细胞以上指标变化的影响；并用ROS清除剂过氧化氢酶、ERK抑制剂U0126和NF-κB (p65) siRNA及cJun siRNA预处理HELF细胞后,再观察低水平NaAsO2所致HELF细胞以上相关指标的变化.结果 NaAsO21.0 μmol·L-1慢性处理可引起HELF细胞增殖加快、软琼脂集落数增加、miR-21水平升高；且随处理时间延长(恶性程度增加)其变化越明显；且NaAsO2 1.0 μmol·L-1急性处理HELF细胞也可引起miR-21水增升高；转染miR-21 mimics可促进NaAsO21.0 μmol·L-1处理0,10和30代HELF细胞增殖加快,而转染anti-miR-21则出现相反效应；转染miR-21 mimics可明显促进NaAsO21.0 μmol·L-1慢性处理10和30代HELF细胞的软琼脂形成集落和细胞迁移能力、而对未经NaAsO2处理的转染HELF细胞却未观察到以上变化；而转染anti-miR-21则引起相反效应；过氧化氢酶可阻滞NaAsO21.0 μmol· L-1和H2O210 μmol·L-1所致HELF细胞ROS水平和miR-21表达升高和ERK,NF-κB(p65)及c-Jun激活；ERK抑制剂U0126可阻滞NaAsO21.0 μmol·L-1急性处理HELF细胞所致miR-21水平升高和NF-κB(p65)及c-Jun激活；转染NF-κB(p65) siRNA和(或)c-Jun siRNA可抑制NaAsO21.0 μmol· L-1所致HELF细胞miR-21水平升高,且共转染即同时关闭c-Jun和NF-κB(p65)时miR-21降低最明显；转染anti-miR-21又可阻滞NaAsO21.0 μmol·L-1急性处理HELF细胞ERK持续激活；且NaAsO2 1.0 μmol·L-1慢性处理可引起HELF细胞ERK,NF-κB(p65)和c-Jun激活,且随处理时间延长(恶性程度增加)其变化越明显.结论 低水平NaAsO2可通过ROS调控ERK后,激活NF-κB(p65)和c-Jun而引起miR-21水平升高,然后又反馈引起ERK持续激活；其在低水平NaAsO2所致HELF细胞恶性转化过程具有重要作用.
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