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目的：建立人血清中万古霉素和去甲万古霉素的HPLC测定方法，用于万古霉素和去甲万古霉素血药浓度临床监测。方法：色谱柱为Shim-pack(150 mm×4.6mm，5μm)，流动相为甲醇-磷酸二氢钾缓冲液(pH=3.2)=19：81，检测波长为23nm，流速1 mL·min-1，柱温为35℃，万古霉素和去甲万古霉素互为内标。结果：万古霉素和去甲万古霉素的保留时间分别为4.835min和4.020 min；标准曲线回归方程分别为Y=32.166 24X-2.117 683，r=0.999 7(n=3)，Y=51.53402X-2.958 621，r=0.999 2(n=3)；线性范围均为2.5～100μg·mL-1；方法回收率＞95%，绝对回收率＞80%，日内和日间RSD＜6.2%。结论：本测定方法快速、准确、简便，适用于万古霉素和去甲万古霉素的临床常规血药浓度的监测。