【摘 要】
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目的 干细胞在再生领域研究的进展为肝硬化的治疗提供了新视角,但干细胞定植数量有限,限制其作用的发挥.本研究探讨CXC趋化因子受体4(CXCR4)促骨髓间充质干细胞(BMSC)定
【出 处】
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The 14th Congress of Gastroenterology China(第十四届全国消化系病学术会议)
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目的 干细胞在再生领域研究的进展为肝硬化的治疗提供了新视角,但干细胞定植数量有限,限制其作用的发挥.本研究探讨CXC趋化因子受体4(CXCR4)促骨髓间充质干细胞(BMSC)定植及其修复肝损伤的机制.方法 构建慢病毒载体CXCR4/绿色荧光蛋白(GFP)和GFP,分离BMSC,并鉴定其表型.采用CCl4法构建雌性肝硬化大鼠动物模型,分成4组,每组15只,分别接受Dulbecco改良Eagle培养液(DMEM)、DMEM+ BMSC、DMEM+ CXCR4/GFP+BMSC和DMEM+ GFP+ BMSC移植,移植后3、7和14d分别处死大鼠,收集血清行肝功能检测,收集肝组织行HE染色观察组织学改变,免疫组织化学检测Y染色体性别决定区(SRY)基因表达,观察移植后3d各组大鼠肝内BMSC定植情况,免疫组织化学法检测大鼠肝组织汇管区和肝实质细胞内细胞角蛋白(CK) 18、CK19、增殖细胞核抗原(PCNA)、Jagged-1、Notch1和上皮细胞黏附分子(EPCAM)的表达,观察BMSC在肝干细胞微环境(Niche)中的作用.结果 成功构建70只肝硬化大鼠动物模型(共购买100只大鼠,死亡率30％左右).成功构建CXCR4慢病毒表达载体,感染此慢病毒的BMSC既能高表达CXCR4基因,又能维持其干性.CXCR4可促进BMSC在肝硬化大鼠肝内的定植.DMEM+ CXCR4/GFP+ BMSC移植组大鼠白蛋白和TG水平较其他组有明显改善,但ALT、AST和TBil等指标变化不明显.SRY基因在早期有表达,晚期未能检测到.肝组织中PCNA、CK18和CK19等表达较DMEM+BMSC移植组和DMEM+GFP+BMSC高,肝脏汇管区表达EPCAM、Notch-1等细胞数也较DMEM+BMSC移植组多.结论 CXCR4修饰的BMSC移植可改善肝硬化大鼠肝功能,其机制并非主要依赖定植细胞的转分化,而可能通过定植的BMSC与肝脏干细胞小生境的相互作用,通过Wnt及其Notch通路,调节Niche中前体细胞向肝细胞和胆管上皮细胞分化,进而修复慢性肝损伤.
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