【摘 要】
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目的:构建以HBc为载体的甲型流感病毒HA和M2e流感通用疫苗(Flu@uV),利用大肠杆菌BL21(DE3)表达系统,进行初步的蛋白表达及纯化.在此基础上,构建DNA流感通用疫苗.
方法:利
【机 构】
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华东理工大学生物工程学院生物反应器工程国家重点实验室上海200237
【出 处】
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中国生物工程学会第六次全国会员代表大会暨第九届学术年会
论文部分内容阅读
目的:构建以HBc为载体的甲型流感病毒HA和M2e流感通用疫苗(Flu@uV),利用大肠杆菌BL21(DE3)表达系统,进行初步的蛋白表达及纯化.在此基础上,构建DNA流感通用疫苗.
方法:利用全基因合成的序列为模板,成功构建HA-M2e-HBc、M2e-HBc、HBc、3M2e-HBc和3HA-3M2e-HBc基因的重组质粒,并在大肠杆菌中表达,经SDS-PAGE、Western Blot和电镜检测其表达.将纯化的蛋白与弗氏佐剂共同免疫小鼠,取小鼠外周血进行流式细胞分析.通过荧光分析和Western Blot初步验证DNA流感通用疫苗在人源胚胎肾细胞(HEK293T)中的表达情况.
结果:成功表达纯化了HA-M2e-HBc、M2e-HBc、HBc和3M2e-HBc四种蛋白,经电镜观察到30nm左右的蛋白纳米颗粒样结构.小鼠外周血流式细胞分析显示HBc和3M2e-HBc可以增加小鼠的免疫力,而HA-M2e-HBc和M2e-HBc对小鼠免疫力的提高没有影响.通过荧光检测和Western Blot检测说明DNA流感通用疫苗在真核细胞中成功表达.
结论:成功构建HBc与甲型流感病毒HA和M2e的病毒样颗粒,为流感通用疫苗的研制奠定了重要基础.
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