精原干细胞是维持精子发生和生殖细胞损伤修复的基础.形态学、谱系追踪和干细胞移植实验证明精原干细胞活性存在于未分化精原细胞中.精原干细胞的自我更新和分化受严格的内外源调控.近年来，我们在研究调控精原干细胞维持调控机制上取得了明显的进展.然而，国内外对精原干细胞的形成过程以及其分子调控机制缺乏了解.精原干细胞在出生后的睾丸中形成，其直接来源可以追溯到原始生殖细胞.性别决定后，雄性生殖细胞被称为性原细胞.性原细胞在快速增殖后，逐渐发生有丝分裂阻断，处于Go静止期.出生后，重新进入G1/S转换期，恢复增殖活性，部分细胞成为精原干细胞，此过程即为性原细胞向精原细胞的过渡.为研究性原细胞进入静止期的生物学意义，我们利用条件性敲除技术，在原始生殖细胞特异敲除控制细胞周期的关键基因Rb1.获得的敲除小鼠生长发育正常，但雄性不育，睾丸重仅为对照的20％.检测生精上皮形态学发现所有成年小鼠曲精小管内无生殖细胞，形成纯支持细胞综合症表型.为追踪表型出现的时间点，我们取胚胎期和初生0-1d的睾丸，进行形态学分析和免疫荧光染色，发现敲除小鼠初生睾丸内存在大量的性原细胞，形态上和对照无明显区别.但Rb1缺失的细胞延迟进入静止期，比对照晚1.5 d进入静止期.出生1d开始，敲除小鼠睾丸内超过95％生殖细胞消失，表明Rb1敲除的性原细胞不能向精原细胞发育.为研究细胞凋亡在Rb1缺失造成的生殖细胞丢失，目前我们正进行双敲除实验以阻断Rb1缺失激活的细胞凋亡通路.综上，该试验结果表示，性原细胞周期受严格的控制，延迟进入周期阻断会阻止性原细胞向精原干细胞正常过渡.