【摘 要】
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DNA损伤与肿瘤的发生有着密切因果关系,是化学致癌效应通道中的关键历程.DNA损伤分析面临的突出瓶颈之一是如何实现从庞大的基因组DNA(数百～数千Kb)中获取痕量DNA损伤产物的结构、分布和水平等准确信息.基于色谱-质谱技术的DNA损伤分析,通常需要将基因组DNA酶切到寡聚核苷酸甚至单个核苷.现有溶液酶切技术适用于短链寡聚核苷酸的分析鉴定,酶解速度慢,存在金属离子干扰,对于分子量数百万的基因组DN
【机 构】
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中国科学院生态环境研究中心环境化学与生态毒理学国家重点实验室,北京,100085
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DNA损伤与肿瘤的发生有着密切因果关系,是化学致癌效应通道中的关键历程.DNA损伤分析面临的突出瓶颈之一是如何实现从庞大的基因组DNA(数百～数千Kb)中获取痕量DNA损伤产物的结构、分布和水平等准确信息.基于色谱-质谱技术的DNA损伤分析,通常需要将基因组DNA酶切到寡聚核苷酸甚至单个核苷.现有溶液酶切技术适用于短链寡聚核苷酸的分析鉴定,酶解速度慢,存在金属离子干扰,对于分子量数百万的基因组DNA酶切则需要更高效、更完全的酶切手段.基于这一需求,我们构建了可将分子量数百万的基因组DNA快速酶切为单核苷水平的级联酶反应器.经过级联酶反应器酶解,DNA样品不用热变性或超滤除酶,可直接进入质谱进行目标核苷产物的定性定量分析,可用于环境污染物暴露下的DNA损伤产物的分析.
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