【摘 要】
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目的 通过对1例1型巨脑性白质脑病伴皮层下囊肿(megalencephalic leukoencephalopathy with subcortical cysts type1,MLC1)患者及其家属进行基因检测分析,确定MLC1基因的突变位点及遗传机制.材料与方法 患者,男,现年10岁.2岁时体检显示头围大(57cm),9岁表现出轻度智力低下,走路不稳,头部CT显示双侧大脑半球各叶脑白质密度广泛
【机 构】
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中南大学生殖与干细胞工程研究所;中信湘雅生殖与遗传专科医院
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目的 通过对1例1型巨脑性白质脑病伴皮层下囊肿(megalencephalic leukoencephalopathy with subcortical cysts type1,MLC1)患者及其家属进行基因检测分析,确定MLC1基因的突变位点及遗传机制.材料与方法 患者,男,现年10岁.2岁时体检显示头围大(57cm),9岁表现出轻度智力低下,走路不稳,头部CT显示双侧大脑半球各叶脑白质密度广泛性减低,皮髓质分界清晰,脑室系统未见扩大、变形及移位.纵裂池前部及额顶部蛛网膜下腔稍扩张,中线结构居中,临床诊断MLC1可能性大.父母非近亲结婚,表型正常,家系内无其他同病患者.抽提患者及父母的外周血DNA,采用聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction PCR)和sanger测序技术对患者MLC1基因进行突变检测,再针对患者的基因突变位点对父母进行PCR-测序分析.并抽取患者及父母的外周血RNA,通过逆转录PCR(reverse transcription PCR RT-PCR)技术对突变位点行表达谱验证.结果 1、患者的MLC1基因存在复合杂合突变：①2号外显子缺失突变c.135 delC,人类基因突变数据库中未记载,生物信息学分析该突变可造成42位密码子之后的阅读框发生改变,使得终止密码子TGA提早出现,形成一个由56个氨基酸组成的截断蛋白.②5号内含子插入突变c.423+2_423+3insT,人类基因突变数据库登记号为CI012031.2、母亲携带缺失杂合突变,父亲携带插入杂合突变.3、逆转录扩增测序显示患者及父亲其中一条等位基因5号外显子片段缺失,其余外显子区域正常,另一条等位基因正常；母亲二条等位基因全部外显子片段均正常.结论 1、c.135delC在HGMD数据库中未见记载,此家系中患者MLC1基因存在复合杂合突变致病,父母均为表型正常携带者.提示c.135 delC为致病突变；2、c.423+2_423+3insT突变会改变MLC1的剪切位点,Peter A.J等人曾利用SPLICEVIEW预测该突变可使5号外显子的剪切供体移至该位点下游94bp处,导致阅读框内出现终止密码子,5号下游各外显子均不表达,最终形成一个包含167位氨基酸残基的截断蛋白,其中N-端141位残基为2～5号外显子正常表达的产物,C-末端因剪切供体后移而延长编码26个无关氨基.本研究逆转录扩增测序结果显示该突变可导致5号外显子零剪切,其上下游外显子仍正常,最终编码产物仅缺少5号外显子编码的34个残基.
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