【摘 要】
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目的 建立马兜铃酸-Ⅰ(AA-Ⅰ)致beagle犬亚急性肝损伤模型,检测炎症细胞因子白介素-6(IL-6)引发肝组织非特异性炎症及IL-6/STAT3炎症通路激活状态,为进一步研究炎症恶性转变分子网络调控提供依据.方法 Beagle犬连续口服AA-Ⅰ(3 mg·kg-1·d-1)10d,第11天处死,搜集肝样本,部分放入4％福尔马林固定后石蜡包埋切片,部分液氮速冻后-80度储存备用.采用H&E染色
【机 构】
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浙江大学药学院药理毒理与生化药学研究所,浙江杭州310058 浙江大学附属第一医院药剂科,浙江杭州
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目的 建立马兜铃酸-Ⅰ(AA-Ⅰ)致beagle犬亚急性肝损伤模型,检测炎症细胞因子白介素-6(IL-6)引发肝组织非特异性炎症及IL-6/STAT3炎症通路激活状态,为进一步研究炎症恶性转变分子网络调控提供依据.方法 Beagle犬连续口服AA-Ⅰ(3 mg·kg-1·d-1)10d,第11天处死,搜集肝样本,部分放入4％福尔马林固定后石蜡包埋切片,部分液氮速冻后-80度储存备用.采用H&E染色观察肝组织损伤,TUNEL染色检测肝组织凋亡,分别采用RT-PCR及ELISA法检测肝组织中IL-6基因表达水平及含量,原位免疫荧光检测IL-6受体IL-6R表达情况,采用免疫组织化学法检测肝组织STAT3及其激活形式p-STAT3分布及表达,Western-blot法检测STAT3激活相关分子事件.结果 HE染色可见给药组肝组织肝索结构紊乱,中央静脉呈现出塌陷状,部分区域出现坏死灶,并可见大量炎症细胞浸润,提示AA-Ⅰ造成beagle犬肝损伤并伴有炎症发生.TUNEL染色结果显示给药组肝组织出现大量细胞核阳染,证明肝损伤过程中伴有大量肝实质细胞凋亡.RT-PCR检测给药组肝组织IL-6基因表达显著性上调(P＜0.05),与ELISA法检测IL-6含量显著增高相一致(P＜0.05),提示炎症细胞因子IL-6参与AA-Ⅰ致肝损伤非特异性炎症.原位免疫荧光结果显示给药组IL-6受体(IL-6R表达上调,证实IL-6经由其受体激活下游分子事件.免疫组织化学结果显示给药组胞浆区出现大量STAT3阳染,大量p-STAT3阳染区则部分出现于胞浆,部分位于胞核,证明IL-6炎症信号直接激活其下游分子STAT3,并由其活化形式p-STAT3入核后放大炎症信号.运用Western blot检测IL-6至STAT3相关分子事件发现,给药组IL-6R,JAK2,p-STAT3蛋白表达均显著上调(P＜0.05),进一步证实IL-6/STAT3通路全面激活.结论 Beagle犬连续经口给予AA-Ⅰ(3 mg·kg-1 ·d-1)10 d,可致肝组织损伤并伴有非特异性炎症"IL-6/STAT3通路"信号激活.
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