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目的:研究谷氨酸棒杆菌谷氰酰胺合成酶在大肠杆菌的表达和作用。
方法:通过PCR方法从Corynebacte rium glutamicum基因组DNA中扩增出谷氨酰胺合成酶基因(glnA),克隆至载体pUC18,经测序鉴定后转化大肠杆菌DH5α。用IPTG诱导表达后SDS-PAGE分析,所表达的谷氯酰胺合成酶(glutamine synthetase)约占总菌蛋白的40%。利用粗酶液对其进行酶活测定表明,工程菌DH5α,pUC18-glnA粗提物中GS的比活是宿主菌本身的4倍。
结论:重组表达质粒pUC18-glnA和基因工程菌构建成功。