论文部分内容阅读
目的采用环孢素A制备大鼠肾损伤模型,结合传统肾功能指标尿素氮(BUN)、肌酐(CR)和组织病理学变化,探讨miRNA-21和miRNA-34a对环孢素A致肾损伤变化意义的诊断价值。方法取Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组和环孢素A组,每组16只,每天分别皮下注射给予0.1 ml/100 g橄榄油和20 mg/kg环孢素A,连续10 d。于试验第6、11 d两组各麻醉8只大鼠,腹主动脉采血,4℃5000 rpm离心15 min后收集血清,以日立7080全自动生化分析仪测定血清BUN、CR,并摘取肾脏,计算肾脏指数,HE染色观察肾组织病理学变化。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测大鼠肾脏miRNA-21和miRNA-34a的表达水平。通过Logistic回归建立回归模型,采用ROC曲线分析给药后第6、1 1 d miRNA-21、miRNA-34a和BUN、CR在环孢素A致肾损伤时的变化。结果试验期间各组动物均无死亡,给药组动物于给药3 d后体重增长缓慢,活动减少、毛色枯燥无光泽。与相应时间点对照组相比,给药后第6、11d环孢素A组大鼠血清BUN明显升高(P<0.01),第11 d血清CR明显性升高(P<0.01);第6、11 d肾脏指数明显升高(P<0.01);病理观察可见第6 d肾脏结构无明显异常,第11 d给药组动物肾脏均出现不同程度的肾小管嗜碱性变。经qRT-PCR检测,第6、11 d肾脏miRNA-21和miRNA-34a均显著性升高(P<0.05或P<0.01)。经ROC曲线分析计算,血清BUN、CR的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.735、0.621,miRNA-21、miRNA-34a的ROC曲线下面积分别为0.933、0.962,提示microRNAs的检验效能高于传统肾功能指标。将两两指标联合检测:BUN+CR的AUC为0.840,miRNA-21+miRNA-34a的AUC为0.990,高于各自对应的各单项指标。对4个指标BUN+CR+miRNA-21+miRNA-34a联合检测,其AUC为0.992,高于联合检测BUN+CR或miRNA-2 1+miRNA-34a。同时通过mirwalk在线预测软件对miRNA-2 1和miRNA-34a进行靶基因预测,将预测的靶基因通过David数据库进行pathway分析,发现miRNA-21调控的通路主要集中于MAPK通路、JAK-STAT通路等;miRNA-34a调控的通路主要集中于MAPK通路、p53通路及Notch信号通路等。其中MAPK通路参与细胞分裂、增殖、迁移、凋亡等多种生理过程;JAK-STAT通路是由细胞因子刺激的信号转导通路,参与细胞的增殖、分化、凋亡以及免疫调节等生物学过程;P53信号通路参与细胞分化、衰老的调节、抑制血管生成等过程。有文献报道显示在药物致肾损伤发生时MAPK通路、P53通路、JAK-STAT通路被激活,表明这2个miRNA不仅在肾损伤时较为敏感,而且具有生物学意义。结论 miRNA-21和miRNA-34a在环孢素A致肾损伤模型中表达量显著升高,且与BUN、CR联合检测时对环孢素A致肾损伤有较高的诊断价值。