【摘 要】
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研究去除重组痘苗病毒中的筛选基因EGFP,构建一株更加便于筛选的痘苗病毒载体。针对痘苗病毒天坛株复制非必需区TK,利用Cre-loxp系统构建了穿梭载体pSK-PTK-EGFP,与TTVV共转(
【机 构】
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军事医学科学院全军基因工程重点实验室; 吉林大学; 深圳出入境检验检疫动植物检验检疫技术中心;
【基金项目】
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国家自然科学基金(30771609)
论文部分内容阅读
研究去除重组痘苗病毒中的筛选基因EGFP,构建一株更加便于筛选的痘苗病毒载体。针对痘苗病毒天坛株复制非必需区TK,利用Cre-loxp系统构建了穿梭载体pSK-PTK-EGFP,与TTVV共转(感)染BHK细胞,通过同源重组获得重组病毒,并利用Brdu和荧光标记对其进行筛选。所获得重组病毒与表达Cre酶的重组表达质粒pVAX-Cre共转(感)染BHK细胞,敲除外源荧光标记基因(EGFP),从而获得无外源筛选标记的天坛株痘苗病毒基因缺失载体,并通过PCR方法对所构建基因缺失载体鉴定。实验结果表明,利用Cre-loxp系统去除重组病毒中筛选基因具有潜在研究价值,为痘苗病毒载体的研究提供了一条解决问题的新途径。
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