【摘 要】
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目的：已知CRELD1(domain1)基因突变与先天性房室隔缺损(AVSD)发病有关,本研究通过基因干扰(SiRNA)和过表达(Over-expression)技术,观察CRELD1基因表达量的改变对心内膜垫(AV Cushion)发育相关基因Sox9、Aggrecan和Scleraxis、Tenascin-c的影响,探讨其在心内膜垫发育过程以及AVSD发生机制中的作用.方法：构建CRELD1的
【机 构】
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上海市儿童医院上海交通大学附属儿童医院心血管内科 200040
【出 处】
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中华医学会第十八次全国儿科学术会议
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目的：已知CRELD1(domain1)基因突变与先天性房室隔缺损(AVSD)发病有关,本研究通过基因干扰(SiRNA)和过表达(Over-expression)技术,观察CRELD1基因表达量的改变对心内膜垫(AV Cushion)发育相关基因Sox9、Aggrecan和Scleraxis、Tenascin-c的影响,探讨其在心内膜垫发育过程以及AVSD发生机制中的作用.方法：构建CRELD1的shRNA慢病毒载体(L-pLV3-shRNA-CRELD1)和野生型CRELD1 cDNA的慢病毒载体(L-pLV4-CRELD1),分别转染体外培养的人的胚肺成纤维细胞(HFL-I),分别以转染相应空载体的质粒慢病毒组作为各自的阴性对照(NC),并添加无血清培养基α-MEM组做空白对照.72小时后,收集细胞,Real-time PCR检测Sox9、Aggrecan和Scleraxis、Tenascin-c的mRNA表达量;Western blot检测Sox9、Aggrecan和Scleraxis、Tenascin-c的蛋白表达量.结果：Real -Time PCR显示Sox9及其下游基因Aggrecan的mRNA表达量在干扰组明显增高，在过表达组显著降低;而Scleraxis干扰组和过表达组均高于各自的阴性对照组，其下游基因Tenascin-C的mRNA表达量在干扰组明显降低，在过表达组则有显著增高。Western blot和Real-TimepCR的检测结果一致。结论：由于CRELD，包含有EGF样结构，故此推测它可能与EGF通路有关。本研究结果表明CRELD1基因对心内膜垫发育的的相关基因Sox9和Aggrecan的表达量有负调节作用，对Tenascin-c的表达量有正调节作用，其作用与EGF通路相似，因此有理由认为CRELD1基因位于EGF信号通路中，其表达异常可以引起心内膜垫的发育异常，进而导致AVSD的发生。
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