【摘 要】
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目的 寻找能有效调节血红素氧化酶1(HO-1)表达的microRNA并对其调节机制进行研究。方法 使用脂质体法将microRNA模拟物及其突变体转入细胞,Western blot及realtime PCR分别检测HO-1蛋白及mRNA表达量,luciferase荧光素酶报告基因检测microRNA模拟物及其突变体对HO-1基因启动子及3UTR的作用。结果 miR-1254可能对血红素氧化酶1表达具
【机 构】
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中科院上海药物研究所药物安全评价中心,上海200120
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目的 寻找能有效调节血红素氧化酶1(HO-1)表达的microRNA并对其调节机制进行研究。方法 使用脂质体法将microRNA模拟物及其突变体转入细胞,Western blot及realtime PCR分别检测HO-1蛋白及mRNA表达量,luciferase荧光素酶报告基因检测microRNA模拟物及其突变体对HO-1基因启动子及3UTR的作用。结果 miR-1254可能对血红素氧化酶1表达具有调节作用。本课题发现在经氯化血红素诱导而高表达HO-1的HEK293和自然状态下高表达HO-1的A549细胞系中,外源转入miR-1254模拟物均可观察到HO-1的mRNA及蛋白水平显著降低,证实miR-1254是能够有效调节HO-1表达的microRNA,而抑制内源性的miR-1254,可以使HO-1的mRNA及蛋白水平升高,直接证明了内源性miR1254对HO-1具有抑制作用。随后,将miR-1254模拟物与含有HO-1的3 非翻译区(3UTR)重组荧光素酶质粒共同转入细胞,发现miR-1254能够降低重组质粒荧光素酶的表达,而将HO-1的3UTR上与miR1254结合位点突变后这种抑制作用消失,提示miR-1254可能具有翻译抑制的功能；同样的方式我们发现miR-1254对HO-1可能还具有转录抑制作用；最后,miR-1254突变实验证明,其5端的"种子区序列"对转录后抑制是重要的。结论 miR-1254能够有效的调节HO-1的表达,并且可能是以转录水平和转录后水平双重抑制的机制进行调节。
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