【摘 要】
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利用反向遗传学操作技术，以A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)毒株为亲本株，采用RT-PCR技术对该病毒的8个基因片段分11段进行扩增，通过与双向转录载体pHW2000连接，转染293T和MDCK共培养细胞，成功拯救出全部基因均来自于A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)的猪流感病毒，生物学实验结果表明该拯救毒株在鸡胚半数感染量，组织培养半数感染量，稳定性试验等方面都与亲
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室 农业部动物流感重点开放实验室，黑龙江 哈尔滨 150001
【出 处】
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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会
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利用反向遗传学操作技术，以A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)毒株为亲本株，采用RT-PCR技术对该病毒的8个基因片段分11段进行扩增，通过与双向转录载体pHW2000连接，转染293T和MDCK共培养细胞，成功拯救出全部基因均来自于A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)的猪流感病毒，生物学实验结果表明该拯救毒株在鸡胚半数感染量，组织培养半数感染量，稳定性试验等方面都与亲本株保持一致。拯救的H3N2亚型猪流感病毒经鸡胚多次传代后血凝价最高可达到1:256，在接种MDCK60h后，血凝价可达到1:64。H3N2亚型猪流感病毒的拯救成功，为研究流感病毒突破种间屏障分子机制和猪流感基因工程疫苗株的筛选奠定了基础。
其他文献
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目的:克隆和表达弓形虫虎源野毒株ROP5蛋白基因。方法:运用RT-PCR技术从弓形虫感染虎腹水中扩增出ROP5基因，将其克隆入T载体中进行测序和分析，并将目的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中进行诱导表达。结果:该基因全长1650bp，编码549个氨基酸。其中前24个氨基酸构成信号肽序列。与GenBank中报道的RH株相比，有12个核苷酸有差异，导致7个氨基酸发生改变，两者核苷酸和推导氨基
从犬新孢子虫cDNA文库筛选出一个编码犬新孢子虫二硫氢键异构酶蛋白的基因。全长基因和它的截头译本被克隆到pGEX载体，并且像融合蛋白一样表达到Escherichia coli。发现截头基因在E.coli中有高水平表达。截头蛋白用在一个用ELISA检测牛犬新孢子虫抗体的实验中。结果显示截头蛋白不能作为诊断牛犬新孢子虫的诊断抗原。另一方面，进行了一些酶活性实验。结果表明：纯化的截头蛋白展示具有类似陪护
从乳腺癌组织中提取总RNA，用RT-PCR扩增出Id-3的编码序列，克隆至表达载体pGEX-6P-1中，重组质粒经PCR、酶切、测序鉴定证明，Id-3基因已正确克隆至pGEX-6P-1中，在大肠杆菌中经IPTG诱导表达，获得相对分子量为39000GST-Id-3融合蛋白，SDS-PAGE分析表达产物，Westernblot检测重组抗原的免疫原性。通过亲和层析法纯化表达的GST-Id-3融合蛋白，并
探讨3株光合细菌CpG-DNA对正常小白鼠免疫功能的影响及作疫苗佐剂的效果。将大肠杆菌CpG-DNA、光合细菌CpG-DNA单独或与新城疫Ⅳ系LaSota株弱毒活疫苗配合免疫小白鼠。血凝抑制试验检测病毒特异性血凝抑制抗体，MTT法检测脾脏淋巴细胞增殖能力，并测定小白鼠的脾脏、胸腺指数。经组间单因素相关性分析，大肠杆菌CpG-DNA 7 d时、光合细菌CpG-DNA 15 d时可明显增强特异性血凝抑
根据GenBank中公开的鸡新城疫病毒(NDV)基因序列合成了一对引物，通过RT-PCR扩增出了鹅源Ⅰ型禽副粘病毒(APMV-1)JG97株的血凝素-神经氨酸酶基因(HN)基因。将扩增产物克隆到pGEM-T载体中，并进行了序列测定。扩增的基因片段含一个完整的、长1716bp的HN基因阅读框，编码的571个氨基酸中含有13个Cys残基和5个潜在的糖基化位点。同源性分析结果表明JG97株与SF02、G
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从广东各发病猪场病料中分离到12株高致病性PRRSV，分别命名为GDB1～GDB12。设计一对ORF7基因的特异性引物，应用RT-PCR方法从各PRRSV病毒株中扩增出ORF7基因片段，将其分别克隆到pMD19-T载体上，通过测序分析获得正确的序列。结果表明，12株PRRSVORF7基因长度为489bp，共编码124个氨基酸。用DNAStar软件对序列进行分析，同时与经典毒株VR-2332株、LV
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