枯萎病是由尖孢镰刀菌引起的土传性病害,病菌寄主范围广,存活时间久,降低瓜类作物产量和质量,给生产带来巨大的经济损失。黑籽南瓜(Cucurbita ficiflia)对枯萎病有很强的抗性,常作为其他瓜类的砧木控制枯萎病的发生和蔓延。选育抗病品种是解决枯萎病的根本途径,因此进一步挖掘黑籽南瓜抗枯萎病基因,可为瓜类抗病育种提供基因资源,对枯萎病的防治具有重要意义。通过对实验室已有的枯萎病菌处理后,对黑籽南瓜转录组测序结果进行分析,设计特异性引物扩增NBS类基因CFRFN2以及PDS基因,分别构建CFRFN2-pTRV2和PDS-pTRV2载体,转化农杆菌菌株GV3101。以黑籽南瓜为试验材料,设置2个处理组和1个对照组,分别采用注射法侵染CFRFN2-pTRV2和PDS-pTRV2,待PDS-pTRV2组出现白化现象,分别对CFRFN2-pTRV2和对照组接种1×108个·mL-1的枯萎病菌,7 d统计其发病情况。结果表明,CFRFN2与其他瓜类抗病基因核苷酸序列相似性在87%～98%之间,由此确定CFRFN2与抗病性相关,为NBS型抗病基因同源序列。PDS基因与其他植物PDS基因核苷酸序列同源性在57.14%～97.00%之间,其中与中国南瓜(C. maxima)、印度南瓜(C. moschata)、西葫芦(C. pepo)等瓜类PDS基因同源性最高。经CFRFN2、PDS基因侵染的黑籽南瓜,23d后PDS-pTRV2沉默植株的叶片,其叶脉出现白化斑点状向整片叶蔓延的白化现象,30 d后大多数叶片出现明显白化现象。分别对对照组和CFRFN2-pTRV2组接种枯萎病菌7 d后,对照组比CFRFN2-pTRV2组表现出了严重的发病情况,因此证明黑籽南瓜CfRFN2基因具有抗病功能。