来源于Symbiobacterium therophilum的内消旋2-氨基庚二酸脱氢酶中Y76对辅酶偏好性影响研究

来源 :中国生物工程学会2014年学术年会暨全国生物技术大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dengdq123
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氨基酸脱氢酶有严格的手性选择性,野生型酶多为L-选择性,已被用于L-氨基酸的合成;已知的D-氨基酸脱氢酶多为膜蛋白,不能被用于工业生产,仅有内消旋-2,6-二氨基庚二酸脱氢酶(meso-2,6-D-diaminopimelic acid dehydrogenase)(DAPDH)(EC1.4.1.16)及变体可用来进行D-氨基酸的生物合成.在辅酶偏好性方面,已知的DAPDH酶及突变子的辅酶偏好性均为NADP(H).脱氢酶在实际应用中都更倾向于用NAD(H)做循环体系。将氨基酸脱氢酶直接还原氨化生产D-氨基酸的方法向实际应用靠近的过程中,需要有NAD(H)依赖型的DAPDH。文章对Y76位是否对辅酶偏好性有影响进行了摸索,此外,对和与辅酶NADP+上磷酸基团有直接作用的R35/R36位也进行了偏好性改造摸索,并和Y76的部分突变子进行了组合突变测试。为研究Y76是否会影响辅酶的偏好性,对其进行了一些定点突变尝试,发现突变子对两种辅酶的偏好性都发生了变化,还尝试构建了R35S/R36V突变子,并和Y76突变子中的一些进行了组合,结果发现R35/R36和76位点组合后对辅酶偏好性有协同影响作用。
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