【摘 要】
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目的：研究HBV多聚酶(polymerase，P)核酸酶H(RNase H)结构区氨基酸的变异对HBV基因组复制的影响。方法：采用“大引物法(Mega-primer)”对HBV P RNasH区核苷酸进行定向变异，构建了D702A、H728V、E731A、D790A、S784L+D790A 5个RNasH突变株。应用分别转染Huh7细胞，转染后第5天从细胞胞浆中回收病毒颗粒(Core)，并提取病毒
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院感染病科，南京，210029 Molecular Microbiology
【出 处】
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第11届全国中医药防治感染病学术大会暨江苏省中西医结合肝病学术年会
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目的：研究HBV多聚酶(polymerase，P)核酸酶H(RNase H)结构区氨基酸的变异对HBV基因组复制的影响。方法：采用“大引物法(Mega-primer)”对HBV P RNasH区核苷酸进行定向变异，构建了D702A、H728V、E731A、D790A、S784L+D790A 5个RNasH突变株。应用分别转染Huh7细胞，转染后第5天从细胞胞浆中回收病毒颗粒(Core)，并提取病毒CoreDNA，作Southern blotting分析HBV基因组复制。结果：D702A、E731A、D790A、S784L+D790A4个RNase H突变株转染的细胞中，HBV DNA复制明显受到抑制，而突变株H728V转染的细胞中HBV DNA与野生株pCMV-HBV-LE-一样，I-IBV DNA复制未受影响。结论 HBV与HIV等逆转录病毒一样，其RNase H活性位点氨基酸构成一个D-E-D-D的motif结构，这些关键位点的氨基酸变异会影响病毒的复制。
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