论文部分内容阅读
为筛选电融合液最佳钙离子浓度及电场强度,提高电融合后小鼠四倍体囊胚率和囊胚细胞数,本实验对2-细胞胚胎采用电融合法进行小鼠四倍体胚胎制作,研究了九种不同钙离子浓度(0.05,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2,1.4 mmol/L)的0.3M甘露醇电融合液对昆明小鼠2-细胞胚胎电融合效果的影响,并对钙离子浓度1.0 mmol/L条件下的电融合场强(500(-)3000 V/cm)进行了筛选.实验结果表明,场强1000V/cm,脉冲时程30 μs,单电脉冲条件下,九种不同钙离子浓度电融合液融合率分别为:50.00±14.14%、66.67±5.77%、66.97±25.58%、62.48±16.39%、64.77±11.30%、67.38±15.32%,84.36±6.98%,77.78±18.43%,80.79±9.35%;钙离子浓度为1.0mmol/L的融合液融合率最高,与钙离子浓度为0.05 mmol/L的融合率差异极显著(P<0.01),与而0.4,0.6,1.2,1.4 mmol/L的融合率差异显著(P<0.05),囊胚率分别为25.00±7.07%、17.89±15.39%、28.79±16.37%、25.91±13.28%、23.68±8.63%、38.56±14.86%、70.70±13.94%、46.11±11.34%、44.92±23.01%,对照组为67.95%±19.34,钙离子浓度为1.0mmol/L融合液的囊胚率最高,与钙离子浓度为0.05,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.4 mmol/L组均差异极显著;与1.2mmol/L浓度组差异显著,但与对照组差异不显著.钙离子浓度为1.0 mmol/L,脉冲时程30μ s,单电脉冲条件下,电场强度为800V/cm融合率最高为86.67%,与500 V/cm相比差异极显著,与2000,2500,3000V/cm差异显著,电场强度为600,800,1000,1200,1400,1500V/cm时组间差异不显著;电场强度为1000V/cm时囊胚率最高为47.22%,但与800V/cm差异不显著.由此说明,融合液的钙离子浓度对胚胎融合及其后期发育的都有影响.