【摘 要】
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本课题利用基因工程菌E. coli作为宿主菌表达该P450酶，以期解决链霉菌发酵过程中转化效率低且成本较高的问题。 具体研究中首先利用DNAWorks设计并人工合成具有大肠杆菌密
【机 构】
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清华大学化学工程系,北京100084
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本课题利用基因工程菌E. coli作为宿主菌表达该P450酶，以期解决链霉菌发酵过程中转化效率低且成本较高的问题。 具体研究中首先利用DNAWorks设计并人工合成具有大肠杆菌密码子偏爱性的P450sca-2基因。重组蛋白在大肠杆菌中能够大量表达，但大多以包涵体的形式存在，少部分可溶表达的蛋白经纯化具有CO差谱和催化美伐他汀的活性。为了进一步提高其可溶性，引入绿色荧光蛋白(GFP)作为报导蛋白，分别以易错PCR和DNA shuffling的方法引入随机突变，经过三轮定向进化，得到了22个可溶性有明显提高的突变株，其中有些突变株几乎完全可溶，其可溶表达量提高了近30倍。本研究为在大肠杆菌中进一步研究细胞色素P450sca-2提供了依据，对该酶的工业应用有很大的指导意义。
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