【摘 要】
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真菌Beta-1,3-葡聚糖酶(分为内切酶和外切酶)具有重要的生物学功能,涉及真菌的众多生长发育过程。尽管目前仅有真菌的一个内切Beta-1,3-葡聚糖酶晶体结构被解析,但它的催化残
【基金项目】
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国家“863”计划(2012AA10180402);国家支撑计划(2015BAD15B05)
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真菌Beta-1,3-葡聚糖酶(分为内切酶和外切酶)具有重要的生物学功能,涉及真菌的众多生长发育过程。尽管目前仅有真菌的一个内切Beta-1,3-葡聚糖酶晶体结构被解析,但它的催化残基是推测性的,没有实验证明;另一方面,真菌外切Beta-1,3-葡聚糖酶的晶体结构是不清楚的。本研究以嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophilum)的Beta-1,3-葡聚糖酶(CtGluN)为研究对象,将它的基因在毕赤酵母中获得高效表达,层析纯化蛋白并进行结晶,得到了它的晶体。X-衍射显示:酶蛋白以单分子不对称形式存在。定点突变实验表明:保守的Q167、Q218、E608、E631涉及酶的催化活性。产物鉴定显示:它是一种外切Beta-1,3-葡聚糖酶。目前酶的晶体结构正在解析中。酶晶体结构解析和定点突变为理解真菌Beta-1,3-葡聚糖酶的催化机制和热稳定性提供证据。
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