【摘 要】
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目的 类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是伴有关节软骨破坏的自身免疫性疾病,由于炎症导致关节局部组织酸化,关节腔内滑液pH显著下降.组织蛋白酶K(cathepsin K)是
【机 构】
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安徽医科大学药学院,安徽天然药物活性研究省级实验室,安徽省天然药物活性成分工程技术研究中心,国家中医药管理局中医药科研三级实验室“中药药理实验室”,合肥230032
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目的 类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是伴有关节软骨破坏的自身免疫性疾病,由于炎症导致关节局部组织酸化,关节腔内滑液pH显著下降.组织蛋白酶K(cathepsin K)是一种酸性的蛋白内切酶,在关节软骨的破坏过程中发挥重要的作用.本文探讨不同胞外pH环境对体外培养的大鼠软骨细胞增殖、凋亡的影响,以及大鼠关节软骨细胞中组织蛋白酶K的表达与胞外酸化的关系.方法 Ⅱ型胶原酶消化法从大鼠关节软骨中分离软骨细胞；细胞传代培养后分为4组分别在pH 5.5,pH 6.0,pH 6.5,pH 7.4不同的胞外酸化环境下培养3h,MTT法检测软骨细胞活力,Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态,Annexin-V/PI双染法检测软骨细胞的凋亡率,实时荧光定量PCR和Western blot检测组织蛋白酶K基因与蛋白的表达.结果 与pH7.4组比较其他各组软骨细胞增殖均受到抑制,其中pH5.5,pH6.0与pH7.4相比差异有统计学显著意义(P＜0.01),pH 5.5和pH 6.0组可见较多的凋亡细胞,且流式细胞仪检测的凋亡率明显高于pH 7.4组(P＜0.01)；组织蛋白酶K的表达与酸性程度成正相关.结论 胞外酸化环境下能明显抑制体外培养软骨细胞增殖、促进软骨细胞凋亡,并且酸性环境能增加组织蛋白酶K的表达,这为类风湿关节炎中关节软骨的破坏发生机制提供了实验依据.
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