【摘 要】
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目的：以高效液相色谱法利用柱前衍生方法,测定及研究鸟氨酸脱羧酶的活性,建立有效准确的高效液相色谱测定方法,进而探讨家兔肠梗阻模型的肠组织中鸟氨酸脱羧酶活性水平及其意义。方法：本文采用高效液相色谱法,采用酶提取液从小肠组织中提取鸟氨酸脱羧酶,后者与鸟氨酸在37℃水浴反应40min生成腐胺,再以苯甲酰氯的甲醇液衍生剂,在37℃水浴中衍生反应40min后,用氯仿萃取三次,取有机相再经氢氧化钠(0.2mo
【机 构】
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目的：以高效液相色谱法利用柱前衍生方法,测定及研究鸟氨酸脱羧酶的活性,建立有效准确的高效液相色谱测定方法,进而探讨家兔肠梗阻模型的肠组织中鸟氨酸脱羧酶活性水平及其意义。方法：本文采用高效液相色谱法,采用酶提取液从小肠组织中提取鸟氨酸脱羧酶,后者与鸟氨酸在37℃水浴反应40min生成腐胺,再以苯甲酰氯的甲醇液衍生剂,在37℃水浴中衍生反应40min后,用氯仿萃取三次,取有机相再经氢氧化钠(0.2mol·L-1)萃取,取有机相吹干,甲醇复溶,进样,色谱柱为十八烷基键合硅胶柱KromasilC18(150mm×Φ4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水60∶40,流速：0.8mL·min-1,泵压：1700psi,检测波长：232nm,柱温：室温,进样量：20μL。结果：该方法的最低检测限0.11 μmol·L-1.腐胺在5.7-1134.4 μmol·L-1浓度范围内呈良好的线性关系,y=1296.2x+23160 (r=0.9998,n=7)。平均回收率为100.8％,RSD为2.23％。日内及日间精密度的相对标准偏差分别为2.65％和2.85％,均小于5％.重复性试验RSD为1.54％。衍生反应产生的杂质峰对腐胺峰无干扰,各组分峰均能得到较好的分离。与上述方法测得,不同给药方法,对家兔肠组织中鸟氨酸脱羧酶活性的影响,随着时间的改变,单剂量给药和合并用药,家兔肠组织中腐胺含量的变化,可得知鸟氨酸脱羧酶活性的变化,能反应出这种给药方法对家兔肠组织内炎症的抑制程度。结论：本法简单,成本低,并能准确的检测出腐胺的浓度,得出鸟氨酸脱羧酶的活性,从而得知三种不同的汤药合并,对家兔小肠组织炎症的抑制程度好。
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