论文部分内容阅读
结直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤,发病机制尚不明确。研究已知,机体免疫失调对结直肠癌的发展关系密切。Tfh细胞(follicular helper T cell,滤泡辅助性T细胞)是一类新发现的T细胞亚型,免疫系统中发挥多重功效。申请人推测,Tfh细胞对结直肠癌的发生和进展有重要影响。本课题首先探讨了 Tfh细胞通过调控CD8+T细胞在结直肠癌中发挥的作用和机制;其次探讨了 Tfh细胞通过调控B细胞在结直肠癌中发挥的作用和机制。研究共分为2部分。1.探讨结直肠癌中Tfh对CD8+T细胞的作用和调控机制。目的:明确直肠癌患者体内Tfh对CD8+T细胞发挥作用的状态以及相关的调控机制。方法:通过流式细胞仪检测Tfh细胞在结直肠癌患者体内的比例;分析PD-1在Tfh细胞上的表达;对比PD-1+Tfh与PD-1-Tfh细胞刺激CD8+T细胞的作用差异;分析Tfh细胞IL-21的分泌水平。结果:Ⅱ期结直肠癌患者中CD4+CXCR5+Tfh细胞的水平显著上调,但在Ⅲ期和Ⅳ期患者中逐渐减少。另一方面,CD4+CXCR5+Tfh细胞中PD-1+细胞的比例随结直肠癌患者的严重程度增加。另外,CD4+CXCR5+PD-1-Tfh细胞促进CD8+T细胞的CD107a表达和IFN-γ表达。促进CD8+T细胞的能力取决于IL-21的表达。晚期阶段的结直肠癌患者的Tfh细胞表现出刺激CD8+T细胞的能力和产生IL-21的能力的逐渐降低。此外,自体表达PD-L1的肿瘤细胞进一步抑制了 PD-1+Tfh细胞的IL-21 表达。结论:这些数据证明Tfh细胞通过IL-21依赖性途径有效增强了 CD8+T细胞的效应功能。然而,由于PD-1/PD-L1介导的抑制,Tfh细胞的这种作用在结直肠癌患者中受到限制。2.探讨结直肠癌中Tfh对B细胞的辅助作用和调控机制。目的:明确直肠癌患者体内Tfh对B细胞辅助作用的异常及相关机制。方法:通过细胞共培养实验检测结直肠癌患者体内Tfh细胞对B细胞活性的作用;分析PD-L1在B细胞上的表达;检测Tfh细胞对PD-L1+B细胞增殖的作用。结果:肿瘤浸润B细胞中PD-L1的表达显著高于来自相同患者的外周血B细胞。STAT1和STAT3的抑制显著下调刺激后的B细胞中PD-L1的表达。CpG刺激的外周血B细胞可以以PD-L1依赖性方式抑制IFN-y表达和CD8+T细胞的增殖。并且,与整个肿瘤浸润B细胞一起孵育的肿瘤浸润CD8+T细胞表现出显著较低的IFN-y表达和更低的增殖。而结直肠癌患者Tfh细胞帮助B细胞分泌免疫球蛋白的能力减弱,但有效刺激PD-L1+B细胞的发育。结论:该研究显示在结直肠癌患者中的Tfh细胞出现功能失调,上调PD-L1+B细胞,从而抑制CD8+T细胞,造成肿瘤的免疫逃避。课题意义:明确了结直肠癌肿瘤通过Tfh细胞功能障碍发挥免疫逃避的途径。并且为开发以Tfh细胞为靶点的新型免疫疗法提供理论依据。